[精选]光度测定法BET检查技术.pptx

光度测定法BET检查技术
湛江安度斯生物有限公司
2009年3月
1、光度测定法方法学分类
2、光度测定法原理
3、动态比浊法BET
4、终点比色法BET
2021/1/28
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1、光度测定法方法学分类
光度测定法（定量法检测）
浊度法
显色法
动态浊度法
终点浊度法
动态显色法
终点显色法
(比浊法)
(比色法)
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2、光度测定法原理
光电转换原理
光度测定法是利用鲎试剂与内***的混合物在反应过程的透光度变化与内***浓度的关系来定量检测内***的一种方法。
当一束光线进入如下光电转换装置时，该装置将产生电流I，我们称I为透光强度。
入射光
反应混合物
透射光
光电池
I
透光容器
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设：初始时的透光强度为Is，某时刻的透光强度为It定义1：透光度（Rt）：  Rt=It/Is(%)
初始时It=Is，Rt=100%，Rt曲线变化趋势是由高至低。
定义2： 吸光度(OD)：
OD= -lg(It/Is)
初始时It=Is，OD=0，OD曲线变化趋势是由低至升高。
选择不同的参数(Rt或OD)将得到不同变化趋势的动态曲线。
T(分)
Is
It
Ie
I
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TAL与内***反应的动态曲线(Rt-T曲线)
以透光度（Rt）为纵座标，时间（T）为横座标，把TAL与内***反应引起反应混合液透光度的变化连续地描绘在座标系中，便得到该反应的动态曲线如图：
Rt（%）
T（分）
动态曲线
100
孕育期
反应期
结束
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TAL与内***反应的动态曲线(OD-T曲线)
以吸光度（OD）为纵座标，时间（T）为横座标，把TAL与内***反应引起反应混合液吸光度的变化连续地描绘在座标系中，便得到该反应的动态曲线如图：
OD
T（分）
动态曲线
0
孕育期
反应期
结束
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动态曲线的特点
把标准内***制备成三个浓度C1、C2、C3（ C1>C2>C3 ），分别与TAL反应，描绘出反应的动态曲线如下图：
C3
Rt（%）
T（分）
C2
C1
分析动态曲线可看出：
内***浓度越高，孕育期越短；
内***浓度越高，反应期曲线越陡；
内***浓度越高，进入结束期越快。
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光度测定法BET试验的相关变量
C3
100
Rt（%）
T（分）
C2
C1
相关变量： 内***浓度(C) 透光度(Rt或OD) 反应时间(T)
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1）动态法原理
固定透光度(Rt)，建立内***浓度与反应时间关系的标准曲线（C-T曲线），用供试品的反应时间比对标准曲线，得出供试品的内***浓度。这里的反应时间是指反应混合液的透光度到达预设透光度值（Rt）的时间。
回归分析
Rt%
预设透光度值R0
T1
T2
T3
92
100
T(分)
C1
C2
C3
LgT=b-kLgC
LgT
T3
T2
T1
C3
C2
C1
LgC
（1）建立标准曲线
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