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生物制品复习资料.doc度。（毒）种制疫苗免疫实验动物，经1-3周后攻毒，观察其保护情况。
稳定性试验 通过传代培养鉴定其毒力稳定与否。细菌20-30代，病毒10代以上。
一、 细菌的规模化培养1、固体培养基表面培养法：属于手工操作。一般将种子液均匀地接种 于固体培养基表面（平皿、大扁瓶），平放于室温内进行静置培养，培养完后弃去凝集水，收 集菌落、菌苔制成混悬液。用于制备诊断抗原和疫苗，此法可根据需要调节细菌浓度，但产量 受限制，且劳动强度大。2、液体静置培养法：此法适用于一般菌苗的生产。培养容器可用大 玻璃瓶，也可用一般发酵罐。按容器的深度加入1/2-2/3的培养基，灭菌后接种种子液1%-2%, 在一定温度下静止培养。厌氧培养时培养基加入约70%,并在灭菌后冷却至37°C,立即接种 种子液，在厌氧条件下培养本法简便、但细菌浓度不高。
3、液体深层通气培养法：又称反应罐通气培养。本法能加速细菌的生长繁殖，提高菌苗的产 量和浓度，缩短培养时间，适宜于大量的培养，是目前菌苗生产的主要方法。应注意：
补充营养物质：根据不同细菌的营养要求，在培养过程中，要适量补充营养物质， 添加葡萄糖补充碳源；添加蛋白豚补充氮源，这样才能更好地发挥通气培养作用，增加菌数。
通气供氧：通气量必需适当，对要培养的细菌特性，必须要预先进行测量，掌握一 定的规律，再进行大量培养。空气中的氧是通过溶氧状态供细菌利用的，而氧容量与通气量、 通气方式、搅拌装置和速度、温度等有关系，另外，不同细菌在不同的生长时期其需氧量也不 相同，故必需预先测定，掌握最佳的通气量。通气量过大，不能增加氧容量，反而会增加消泡 剂的用量。③控制最适生长的PH：④通入气体必须是无菌的：
4、透析培养法：指培养液与培养基之间隔一层半透膜的培养方法。
这种透析膜只允许小分子量的营养成分透过，而不允许大分子的细菌或***通过，因此可使培 养基中高浓度的营养物质通过透析膜扩散到接种有细菌的培养室内，使细菌在生长过程中，不 断获得必需的营养物质。因此，该法可获得高浓度的细菌或***。
二、 病毒的培养（一）动物培养法（二）禽胚培养法（三）细胞培养法
SPF动物（specific pathogen-free animals, SPF）,无特定病原体动物，指在一个动物群中，不存 在某些特定的病原微生物和寄生虫的动物。接种途径：常用的途径有尿囊腔：9-11日龄 绒毛尿囊膜：11 —13日龄 卵黄囊：6—9日龄 羊膜腔：10—12日龄 （三）细胞培养（2）细胞培养的方法
①静置培养将细胞悬液接入培养瓶或培养板中置温箱内静置培养，细胞贴壁生长繁殖成单层 后即可接毒②转瓶培养将细胞悬液接入转瓶后置于细胞转瓶机上进行培养，使贴壁细胞不始 终浸于培养液中，从而有利于细胞呼吸和物质交换而加速细胞的生长。③悬浮培养 通过振荡 或转动装置使细胞始终分散悬浮于培养液内的培养方法。④微载体以细小的微载体颗粒作为 细胞载体，通过搅拌悬浮于培养液内，使细胞在微载体表面长成单层的一种细胞培养技术。该
方法扩大了细胞的附着面，能充分利用生长空间和营养液，因此大大提高了细胞的生长效率和 产量。培养时多在发酵罐中进行，兼有单层和悬浮培养的优点。
3、细胞的制备抗原液的培养，灭活"浓缩（稀释），与佐剂配苗♦分装。检验
一、 抗原液的培养