生物钟基因per2在结直肠癌诊断中的应用价值探讨.doc

生物钟基因per2在结直肠癌诊断中的应用价值探讨.doc生物钟基因Per2在结直肠癌诊断中的应用价值探讨
【摘要】目的：具体探讨生物钟基因Per2在结直肠癌诊断中的应 用价值。方法：选择2009年4月至2013年1月间32例于我院行结直肠 癌根治术患者的手术切除标本作为样本，同期选择32例正常肠道组织作 为对照样本，采用免疫组织化学方法检测生物钟基因Per2蛋白的表达。 结果：切片镜下显示肿瘤中较配对的正常肠道组织中Per2蛋白的表达呈 明显增高，在细胞核及细胞浆中均见强阳性。随Dukes分期的增强，Per2 表达阳性表达率及阳性强度呈递增趋势，Per2中度及强阳性表达与Dukes 分期呈正相关(P<)o结论：结直肠肿瘤存在生长凋亡的昼夜节律性, 生物钟基因Per2可能参与了肿瘤的发生发展及侵袭转移。
【关键词】生物钟基因；结直肠癌；Per2蛋白；免疫组织化学方法； Dukes分期
【中图分类号】R735【文献标识码】A【文章编号】1004 —7484(2013) 11-0148-01
众所周知，人类、老鼠和其它许多植物、动物都拥有一个内在的生物 钟，使得生理、行为和生化的周期节奏与一天24小时的昼夜循环相一致。 当前研究显示，生物的昼夜节律失调是肿瘤发生和进展的内在因素之一。 恶性肿瘤的研究目前发展到从分子水平和蛋白水平寻找防治新手段 [1-2L众多数据显示，生物钟基因per2基因的过表达可以促进肿瘤细 胞的凋亡，促使实验动物体内的肿瘤缩小，其过表达还可以对细胞的放射
性损伤起到修复作用，这一发现对肿瘤的临床治疗具有重要的指导意义 [3-4-5]o本文为此具体综述与临床分析了生物钟基因Per2在肿瘤学的 研究概述与应用价值，现分析如下：
1资料与方法
1. 1研究对象
选择2009年4月至2012年1月间32例于我院行结直肠癌根治术患 者的手术切除标本作为样本。入选标准：所有病例术前均未行相关手术治 疗或放化疗。所有病例经术后病理证实为结直肠腺癌；患者同意留取标本 进行研究。其中男性17例，女性15例；年龄分布于40-79岁，平均61. 25 ±，中位年龄61岁；病理组成：隆起型腺癌II级16例，溃疡型 腺癌II级10例，浸润型腺癌II级6例；Dukes分期：A期10例，B期 12例，C期10例。同期选择32例正常肠道组织作为对照。
1. 2标本米集
在手术切除标本自大体切断所有血供后15分钟内，自肿瘤侵犯处肠 壁取材作为实验组，自远离肿瘤近标本切缘处肠壁取材作为对照组，所取 标本立即投入液氮中暂存，后放入-70°C冰箱保存，用作组织RNA的抽提。 全部标本经10%中***尔马林固定，石蜡切片用作免疫组织化学检验。
1. 3免疫组织化学方法检测
免疫组织化学检测采用Envision两步法，DAB显色；石蜡切片经二甲 苯脱蜡三次，经100%、95%、80%的酒精蒸馅水水化，蒸馅水充分洗净； 0. 3%H202甲醇液室温20分钟，TBS (0. 05M, PH7. 6,下同)洗5分钟X3
次；枸椽酸缓冲液(, )高温预热5分钟，将脱腊水化后的组 织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中火加热5分 钟X2次，低火保温5分钟后取出微波盒，冷却至室温取出玻片，先用蒸 馅水洗两次后用TBS洗5分钟X3次。5%小牛血清蛋白3TC孵