首选C18/C8:以15cm为佳,可解决80%的样品分析,柱效应大于50000。 特殊样品用特定的柱子 不同柱子其保留性差异很大,相同条件,不同柱子比例会不一样。 不同色谱柱需合适的pH范围,-,有的色谱柱比较耐碱,kromasil可以到10,而杂化xterra在1-12,XDB在pH3-11. 第5页/共25页 容量因子和死时间的测量 在HPLC分析中,容量因子k′是一个非常重要的参数,对如何选择流动相的溶剂组成、改善多组分分离的选择性都发挥着重要的作用。 k′=t ′R/t M t ′R = t R - t M 在HPLC分析中,死时间表示了一个在高效液相色谱固定相上未被滞留组分的保留时间。
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t M = Lπr2 εT / F 式中,L为柱长,cm;r为柱内径半径,cm;F为流动相体积流速,cm3/s; εT 为总孔率,,对化学键和固定相、,。 死时间t M的测量比较困难,有以下几种方法:
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t M =ΦηL2/△pd p2 式中,Φ为阻抗因子;η为流动相的动力黏度;L为柱长; △p为柱压力降;d p为固定相粒径
当dc/dp≥10 时,可按下述公式计算 t M: t M =L / u 对全多孔固定相 u= 对非多孔固定相 u=3F/dc2