HPLC常见问题学习经验分享PPT教案.pptx

HPLC常见问题学****经验分享
流动相在线吸滤头
安捷伦单晶玻璃滤头（石英砂芯）
岛津烧结不锈钢滤头（俗称沉子）
第1页/共10页
材质：玻璃砂芯、不锈钢烧结（或陶瓷）
规格：5--20μm
功能：滤除流动相中的固体杂质，防止较大固 体不溶物进入液相色谱系统
日常维护
现象：管路中不断有起泡生成，柱压升高或 上下波动
故障：吸滤头污染、堵塞
措施：
玻璃砂芯：吸滤头取下，30-40%***溶液浸泡（24小时以内），用蒸馏水清洗中性，再用甲醇清洗保存
不锈钢烧结：用异丙醇（或5%稀***）进行超声波浴清洗，再用蒸馏水清洗至中性
第2页/共10页
系统漏液！一般多为色谱柱与peek头螺旋连接处；若系统已经报警，检查为漏液后，一定检查柱温箱漏液传感器是否残留液体，若有擦干或晾干即可。
脱气完成后Purge阀记得拧紧哪！
实验开始前柱压升高后又逐渐降低，此为正常，可能与色谱柱尚未平衡好有关；若一直居高不下，则考虑可能管路中部分堵了，一般从检测器开始反向逐步排查。
容易堵的部分：流动相吸滤头、过滤白头、各种阀。
柱压
无柱压或柱压突然下降：
柱压升高：
第3页/共10页
首先考虑系统是否引入气泡。流动相超声后，一般还要进行在线脱气处理（purge），purge时，一定要从吸滤头处开始观察，看吸滤头内部及管路内是否有气泡。有时因为吸滤头倾斜角度关系，其内部的气泡一直无法排去，而在后期的实验中存在不确定性，因此需要我们手动操作。
柱压上下波动：
其次，考虑有机相和缓冲盐的比例是否合适？盐少量析出可能会导致柱压波动性下降；长时间的话波动性下降后将不能恢复至初柱压。
若流动相长期使用乙***，则要考虑到乙***的聚合沉积问题。可打开purge阀，大流速冲洗30min。
养成良好的操作****惯，使用完乙***后立即用甲醇把乙***通道的乙***充分置换出来，不要使乙***在一个通道内长时间滞留。
第4页/共10页
空白溶剂
在保证样品溶解的前提下，尽量使溶剂的极性略大于流动相的极性，即溶剂的洗脱能力小于流动相。例如，当用大比例有机相（如纯甲醇、纯乙***）溶解样品，而流动相中水相占一定比例进行洗脱时，单一纯物质容易出现双峰。
空白溶剂峰应对待测样品峰及其他杂质峰无干扰，即保证一定的分离度。进行样品分析前一般先进空白溶剂，再进样品，以辨认溶剂杂质峰及后补空白溶剂时可能会有残留样品干扰。
考虑对待测样品的溶解性：
考虑对待测物质是否存在干扰：
第5页/共10页
问题1：死体积（死时间）之后的洗脱中出现的溶剂峰？
一般，溶剂出峰时间都在3--5min，即溶剂从进样器到达检测池所通过的死体积所需时间。
死体积（死时间）之后的洗脱中出现的溶剂峰，一般应先考虑是否为其他因素造成的。如所用试剂影响、样品残留、滤膜过滤引入杂质等，其中流动相主要为水的问题（易污染、含其他杂质）
问题2：空白溶剂峰与样品溶液溶剂峰保留时间一致，但峰强度（峰高）不一致？
几种可能？
样品溶液溶剂峰强度高于空白溶剂峰：
样品溶液溶剂峰强度低于空白溶剂峰：
第6页/共10页
梯度洗脱
溶剂的互溶性：有些溶剂在一定的比例内互溶，超出一定的范围