肿瘤患者外周血中血管内皮细胞及血管生成相关因子研究.pdf

天津医科大学
硕士学位论文
肿瘤患者外周血中血管内皮细胞及血管生成相关因子的研究
姓名:李慧
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:郝希山

摘要的因子一、—猯以及的水平。峁琢龌颊咭的发生、发展和转移中起重要作用。对于肿瘤血管生成,传统的观点认为是由已有血管通过出芽方式完成的;但最近的研究证实外周血中的血管内皮及其前体细胞的动员与募集,对肿瘤血管生成具有十分重要的作用。本项目应用流式细胞法对例肿瘤患者及例『H耍庵苎V械难费9苣谄は赴,以及骨髓来源的循环血管检测,证实了外周血中疌的存在,发现肿瘤患者疌含量证实生血因子在动员造血干细胞的同时,对血管内皮干/祖细胞亦有示这些因子在血管内皮及其前体细胞的动员中具有一定作用。同时,建立了血管内皮细胞体外分化扩增的方法,证实外周血中的血管内皮前体细胞可在体外分化为成熟的内皮细胞,经电镜和免疫组化检测符合血管内皮细胞的主要特征,从而为血管内皮细胞分化及功能的研究奠定了基础。子水平高于正常人,而且与肿瘤的淋巴结转移及远处转移相关,为肿9苌墒嵌裥灾琢鲅莼讨胁豢扇鄙俚闹匾;方冢谥琢内皮前体细胞珻辛高于正常对照组,提示肿瘤患者体内存在血管内皮及其前体细胞的动员。经造血干细胞动员/—后,外周血中疌升高,动员作用。血管生成相关因子的表达水平与外周血疌相关,提肿瘤发生时血管调节因子失去平衡,血管生长因子分泌增加。斗、本研究应用椒ḿ觳饬琢龌颊哐G逯杏胙9苌上喙灭律医科人学硕芯可畚、
肿瘤局部表达水平与血清较喙亍用荧光定量—椒ḿ觳饬例肺癌组织及相应癌旁组织中况。微血管密度隫泶锼郊巴庵苎狢/薰兀的评价。同时,血管内皮细胞体外分化扩增方法的建立,为血管内皮的表达,发现肿瘤组织中的表达水平高于癌旁组织。应用免疫组化方法检测了例患者肿瘤局部的血管内皮细胞及的表达情且血管内皮干/祖细胞具有进一步分化增殖的能力。对于循环血管内皮及其前体细胞,以及血管生长因子的检测,有助于肿瘤转移及预后细胞功能、以及抗血管基因治疗等的深入研究奠定了基础。关键词:血管生成琢鰆血管生长因子,循环血管内皮细胞;瘤转移及预后等方面的研究提供了有重要参考价值的指标。同时,应通过本研究验证了外周血中血管内皮及其前体细胞的存在,而循环血管内皮前体细胞灭乱娇迫搜鉲芯可畚/、
疺篴痶/天津医科人学硕簕可畚瓵/,..
前言血管生成是恶性肿瘤演化过程中不可缺少的重要环节。血管是维持迅速生长的肿瘤氧供、供养、代谢产物排泄甚至转移发生的基础。肿瘤组织中除了具有较高的血管密度外,更为重要的是这些血多方面均较正常情况下的血管有很大的差异。新血管的生成主要由两个完全不同的过程来完成。一个是血管发生生长,即由血管母细胞在原位分化成内皮细胞并组装成初级血管的过程,该种方式多见于胚胎发育阶段的个体:另一是血管生成生长,是从已有血管部位通过出芽肿瘤血管生成中,血管内皮细胞的来源主要有以下两种途径:从已有血管原位上通过出芽方式完成;成体循环血中存在内位参与新生血管的形成。当肿瘤不能从临近组织中募集到内皮细胞时,骨髓来源的内皮干/祖细胞将作为主要来源参与到肿瘤血管床的新生血管生成过程中,这种情况在正常血管则很少发生。正常组织的血管处于静止状态,这时血管的『旱鹘谝蜃哟τ谄衡状态。而恶性肿瘤发生时,正负调节因子失去平衡导致血管增生。在这一过程中不仅促血管生长因子分泌增加,而且内源性抑制血管生长因子的产生相应减少。目前,已发现多种与肿瘤血管生成相关的因子,如血管生长因子、纤维生长因子、转化生长因管在空间和形态结构、细胞组成、功能及发挥作用的分子基础等诸方式长出新生血管的过程,该种方式在胚胎和出生后各阶段均可存皮前体细胞,在创伤愈合或肿瘤生长过程中,被募集到新生血管部在。凡津医科人学硕Q芯可凼
同时,发现除疾病状态下出现血管内皮细胞的动员外,生血因子些前体细胞可再进一步分化为成熟的内皮细胞。本研究对肿瘤患者血管内皮及其前体细胞的动员、血管生成相关因子的表达以及血管内皮前体细胞的体外分化扩增过程进行探讨,旨在对肿瘤患者外周血中干细胞源性血管内皮细胞在肿瘤血管生成中的意义和机制做一初步分析。子约耙鹊核匮ひ蜃等。瓹、—怨撬柚械难9苣谄で疤逑赴嘤卸弊饔茫天津医科人学硕芯可垡.
材料和方法:二:僵至堕萱内座绳厘丞鱼萱凼廛王』塑塑照的捡型循环血管内皮细胞循环血管内皮前体细胞瓯纠丛◆例肿瘤患者外周血,病种分布如下图庵苎狢及觳獠≈址植◆例鲁H送庵苎赴砻姹曛血管内皮细胞:。.!R血管内皮干/祖细胞:!、一固寮捌渫投哉站鹤訢公司天律医科人学坝芯可垤
觳夥椒①细胞表型检测一采用荧光抗体标记,流式细胞仪检测抽取抗凝血1瓯居肞对倍稀释,分离,离一分钟,次,计数。将细胞加入孔板中,每孔×尤氪饪固,娣跤种印O吹颖瓯次,用%多聚甲醛固定,流式细胞仪检测。②流式