肥大细胞在糖尿病肾病肾间质纤维化中的作用及机制研究.pdf

原创性声明本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。储虢’弘率嗍卫年』月』曰学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文, 允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》, 并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名: 导师签名捉日期:型年』月堕日摘要糖尿病肾脏疾病(Diabetic kidneydisease,DKD)已成为终末期肾功能衰竭的最重要原因之一。DKD早期可出现肾小管间质纤维化,且不依赖。肾小球病变直接加速肾功能的恶化,但其机制复杂。研究肾问质纤维化的发病机理、靶向阻断参与纤维化的细胞及信号通路,延缓 DKD肾小管间质纤维化、阻止肾功能的进展已成为当前的研究热点。以往认为DKD是一种非炎症性疾病,近年来关于炎症细胞及炎症因子在DKD肾间质纤维化中的作用越来越受到重视,而肥大细胞作为一种重要的炎症细胞也逐渐被关注。肥大细胞起源于骨髓CD3辑多能祖细胞,肥大细胞胞浆颗粒中富含炎症介质,大量研究发现肥大细胞参与了许多慢性肾脏病的肾间质纤维化。有研究报道DKD患者肾活检组织中肾间质肥大细胞表达明显增加,并与肾间质纤维化的程度及肾功能的进展密切相关。但肥大细胞参与DKD肾间质纤维化的具体作用机制及信号通路尚不完全清楚。 SCF/,SCF、 可在肾间质细胞及肾小管上皮细胞中表达,而且SCF可促进胶原的合成及细胞外基质的聚集,其在DKD肾间质纤维化中的作用有待进一步研究。目的本课题拟通过检测DKD患者肾组织,同时建立DKD动物模型, 从三个方面进行研究:1、检测肥大细胞在DKD患者肾间质的浸润本研究得到湖南省自然科学基金(重点项目)(编号:10JJ2011)资助中文摘要情况及与肾间质纤维化的关系;,观察肥大细胞对DKD大鼠肾间质纤维化的作用;,探讨肥大细胞介导DKD肾间质纤维化的机制是否与阻断 SCF/。研究肥大细胞在DKD肾间质纤维化中的作用及机制, 为开发研究延缓肾功能进展的有效药物提供理论依据。方法 ,---2011年来我院肾内科就诊,并于我院肾脏病研究所行肾活检,结合临床及病理诊断为DKD患者共14例。同时选取7 例诊断为微小病变的病例作为对照组,所选取的对照组肾组织病变轻微,未见明显炎症细胞浸润及间质纤维化。应用甲苯***蓝染色检测肥大细胞浸润,免疫组化检测DKD肾组织及微小病变肾组织肥大细胞特异性标志~C3aR的分布情况 :SD大鼠随机分为正常对照组(n=6)、 DKD模型组和曲尼斯特低剂量和高剂量治疗组(n=24)。采用高糖高脂饲料喂养联合低剂量STZ注射诱发SD大鼠DKD模型(STZ溶于 ,),对照组只注射相同体积的枸橼酸盐缓冲液,72h后测定血糖和尿糖,血糖值>,尿糖值+++~++++者确定为糖尿病模型。成模后,曲尼斯特治疗组予曲尼斯特(200mg/kg/d和400mg/kg/d)分2次灌胃。于第8周末处死大鼠,收集大鼠24小时尿液测24小时尿白蛋白排泄量,收集血测肾功能及血白蛋白,取部分肾组织置于4%中性甲醛溶液中固定,观察各组之间肾脏病理学变化。采用免疫组化方法检测肾组织C3aR、FN、中文摘要 ColI、,用Western blot及PCR方法检测肾组织FN、Col I、。结果 , 并与肾间质纤维化损伤及肾功能进展密切相关。 :72h测定血糖和尿糖,血糖值>,尿糖值+++—十卜},确定为糖尿病模型。8周末时,糖尿病大鼠的血糖显著高于正常对照组,且出现了明显的“三多一少”症状,检测尿白蛋白明显增高,Masson染色肾小管间质出现明显的胶原沉积,说明DKD大鼠模型建立是成功的。正常肾组织肾小管问质区域及髓质部分偶可见肥大细胞,8周末糖尿病肾组织肥大细胞浸润明显增加。 ,DKD模型组肥大细胞浸润明显增加,肾小管间质胶原相对面积增加