大鼠视网膜缺血再灌注后IL1β免疫组化研究川芎嗪对视网膜缺血再灌注损伤影响.pdf

华中科技大学同济医学院硕士学位论文
大鼠视网膜缺血再灌注后的免疫组化研究
川苟嗓对视网膜缺血再灌注损伤的影响
研究生杨云波
导师丁正平
摘要
目的观察大鼠视网膜缺血再灌注后,
白细胞介素多肤在视网膜表达是否变化,以及川芍嗦对
损伤的影响。
污法采用前房灌注生理盐水,形成高眼压,诱导
大鼠视网膜缺血分钟,解除高眼压,建立模型治疗组。在缺血前
分钟和再灌注开始时,予川芍啧腹腔注射。对照组予等量生
理盐水。缺血分钟,再灌注作视网膜冰冻切片,免疫
组化观察。缺血分钟,再灌注分钟、测视网膜丙二醛含
量,再灌注作光镜观察。
结果后,视网膜神经节细层可见表达,而正常情
况下未见表达。川芍啧治疗组视网膜中丙二醛含量较对照组显著性
降低。组织病理学显示川芍嗓治疗组损害减轻才一“
结论我们的研究提示多肤在蛋白质水平参与损伤发生,川
芍啧对视网膜缺血再灌注损伤具有防护作用。
关键词视网膜缺血再灌注白细胞介素川芍啧
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月舌
视网膜缺血再灌注扭损伤,在许多情
况下可以发生。如视网膜血管栓塞的溶栓治疗、青光眼高眼压的降压治疗
等。探讨损伤的发生机理、寻找防治损伤的药物,具有重要的
理论和实践意义。
目前己经明确有多种因素参与损伤的发生。如自由基损伤、刺
激性氨基酸的毒性、钙超载,促进细胞凋亡因素,细胞因子,粘附
分子,白细胞聚集导致的无复流现象等等。但尚未完全弄清楚。
国外研究发现,后,白细胞介素的
表达明显增加。但后,多肤在视网膜分布的变化,尚未阐明。
川芍嗦可以保护心肌、肝脏等缺血再灌注损伤,但对有无影响,
尚未见报道。
本文采用免疫组织化学方法,研究了后多肤在大鼠视网
膜分布的变化,并观察了川芍啧对损伤的影响。
材料与方法
一主要仪器和试剂
可见光分光光度计、电子天平由协和医院实验中心提供。恒冷箱切片
机由同济医院病理科提供。丙二醛试剂盒南京建成生物研究所。
的一抗山羊多抗、特异北京中山生物技术有限公司。
二实验对象和动物模型制作
实验对象及操作方法
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取雄性大鼠,体重由同济医学院动物实验中心提供。
饲养在正常昼夜周期的环境中。戊巴比妥钠体重腹腔注射麻醉。
将连接生理盐水瓶输液管的号头皮针刺入前房,保持输液瓶与动物垂直
距离处,此时前房灌注可形成高眼压。外观可见球结膜
苍白。眼底镜检查可见视网膜苍白、水肿,眼底血管断流,拔除穿刺针,
恢复视网膜血供,即成模型。实验过程中保持动物体温
并间断点抗生素眼药水,拔除穿刺针后,涂抗生素眼膏。
实验分组
雄性大鼠只,随机分成组,详见表格。每只大鼠左眼为
自身对照眼,右眼为缺血再灌注眼。另设与实验组环境相同的大鼠作正常
对照组。缺血分钟后,再灌注和大鼠,以及正常对照组、自
身对照眼,均作视网膜冰冻切片,免疫组化检测。缺血分钟,
再灌注大鼠各组和正常对照组作视网膜光镜检查。缺血分钟,再
灌注分钟、和各时段大鼠均为只,测其视网膜匀浆中的丙
二醛含量。
表实验分组
组别实验过程
组缺血再灌注组缺血分钟,再灌注分钟或

组川芍啧组只缺血前分钟及再灌注开始时,予川芍啧
腹腔注射缺血分钟,再灌注分钟或

组生理盐水对照只等量生理盐水缺血前分钟及再灌注开始时,腹腔
注射,缺血分钟,再灌注分钟或
组正常对照组只未作任何处理
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三观察指标及测定方法
丙二醛的测定
断头处死大鼠,迅速摘除眼球,置于冰环境中。环行切开角巩缘,弃
去眼前节及玻璃体。外翻眼球壁,在解剖显微镜下剥离视网膜,电子天平
称湿重。用双蒸水配成的湿重,进行匀浆。将匀浆倒入离心管,
转分钟,离心分钟。取上清液进行光电比色测定,光波为。按
试剂盒说明书操作。测量视网膜丙二醛含量,单位。所测丙二
醛数据,以均数土标准差表示。组之间及同一组内各时段之间
比较采用方差分析,组各时段和正常组之间比较采用检验。
统计软件处理。
光镜检查
断头处死大鼠,迅速摘除眼球,玻璃体内注射溶液丙酮
冰醋酸、甲醛蒸馏水。然后浸入液中固定
小时每日更换固定液,天后取材。石蜡包埋,切片,染色,光镜
下观察。
冰冻切片制作
断头处死大鼠,迅速摘除眼球。取出切片机冷冻棒上的持物器,按
郑湖玲介绍的方法,冷冻眼球后,取出晶体,并用包埋剂填满眼
球空腔,再冷冻。按矢状面修切标本表面,至见整个眼球切面时,选其中
一切片