高效液相色谱分析技术—应用陈桂良.ppt

高效液相色谱分析技术—
上海市食品药品检验所
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高效液相色谱法应用指导原则
用于药品的杂质检查，主要检查原料及制剂中引入的杂质或降解产物，尤其是难于用TLC分离的性质相似的有关物质。
用于原料药的含量测定，主要用于多组分或含有几种杂质，或因杂质干扰，常规方法又难以分离或分离手段繁杂的品种。
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用于制剂及复方制剂的含量测定，主要用于所含杂质或赋形剂干扰含量测定、需先经繁杂分离后才能测定、或各成分间相互干扰的品种。
首选填料为十八烷基硅烷键合硅胶、硅胶及辛烷基硅胶。如经试用不适合时，再选用其他填料。首选国产分离柱，并应比较不同分离柱的理论板数。应选择适宜的通用性较强的分离往。
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流动相首选甲醇-水系统，如经试用不适合时，再选用其他溶剂。为保护仪器，应尽可能少用含有缓冲液的流动相。
内标物质应选择易得并不对测定方法产生干扰的物质，原料药的含量测定避免使用内标法。
检测器首选UV检测器。
用于药品的杂质检查时，应避免采用峰面积归一化法。
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枸橼酸***米芬
异构体 照高效液相色谱法，用硅胶为填充剂，正已烷-***仿-三乙***（80:20:）为流动相检测波长为302nm；理论板数按顺式异构体峰计算应不低于3000，顺、。，取20µl注入液相色谱仪，记录色谱图，其保留时间依次为顺式异构体（E）与反式异构体（Z），按峰面积归一法计算，供试品中含反式异构体应为30-50%。
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甲氨蝶呤含量测定
照高效液相色谱法（附录××）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙***-%枸橼酸溶液-%无水磷酸氢二钠溶液（10:10:80）为流动相，检测波长为302nm。理论板数按甲氨喋呤峰计算并不低于1000，。
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测定法 取本品适量，精密称定，，精密量取10µl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取曾测定干燥失重的甲氨蝶呤对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
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泼尼松龙含量测定
照高效液相色谱法（附录××）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水（65:35）为流动相，检测波长为240nm。理论板数按泼尼松龙峰峰计算应不低于1000，。
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内标溶液的制备 取块诺***，,摇匀,即得。
测定法 取泼尼松龙对照品适量,精密称定,加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为对照品溶液;精密量取该溶液与内标溶液各5ml，置50ml量瓶中，用甲醇稀释成50ml，摇匀,取10µl注入液相色谱仪,记录色谱图；另取本品适量,同法测定,按内标法以峰面积计算，即得。
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HPLC在药品质量控制中的应用
鉴别
杂质分析
复方制剂分析
含量测定
对照品标定
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