蕙兰组织培养操作技术.doc

蕙兰组织培养操作技术
　　利用植物组织培养大量繁殖种苗，在兰花中的应用最早。
　　种子繁殖时，从种子萌发到开花需要6－7年。如果从亲本植株获得相同的材料，进行分株等无性繁殖，就会缩短开花期。
　　随着植物组织培养技术的开发，从茎尖取出到开花株只要4年左右时间，并且在短期内得到大量繁殖。
　　下面介绍蕙兰组培培养大量繁殖的操作顺序。
　　
　　1、母株的选择
　　
　　选择花和叶片的形态、颜色、株形、生长发育状态良好的植株。
　　
　　2、采芽
　　
　　使用茎尖作为组织培养外植体时，取新叶尚未展开、正在伸长的新芽。
　　这是因为随着蕙兰苗生长，生长点附近的分裂组织的活性会慢慢减弱。另外，随着叶片的展开，杂菌容易进入新芽内部，从而造成接种后污染严重。
　　
　　3、茎尖的摘出
　　
　　(1)蕙兰的叶片包住茎部分，且茎比较短。叶片基部的柔软部分，尽量不要留在茎上，一边用解剖刀的先端切开叶片基部，一边小心地从外向里一片一片地剥去叶片。
　　(2)茎尖外植体的大小为了获得脱病毒植株，：从脱毒植株进行大量繁殖时，取茎尖1mm－2mm为好。
　　
　　4、培养基
　　
　　
　　(1)从茎尖获得原球茎(PLB)的初代培养基可采用京都培养基(Hyponex)、Knudson C(KC)、1／2MS培养基，不添加6-苄基嘌吟(BA)、激动素(KT)、萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸(1BA)等植物生长调节剂。
　　(2)原球茎(PLB)增殖培养基中，添加NAA1mg／L。
　　
　　5、培养
　　
　　(1)摘出的茎尖接种后放置在培养室中，温度23℃，光照强度1500lxz，每天光照时间为12－16小时，1个月左右开始形成原球茎(PLB)。
　　(2)形成的原球茎(PLB)继代培养在液体增殖培养基中，进行振荡培养，在液体培养基中的原球茎(PLB)不断地增殖。
　　(3)最初培养时的增殖率较低，培养1个月左右后再添加新鲜的液体增殖培养基，这样培养1个月可增殖6－7倍。