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PCR诱变
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PCR诱变
（1）PCR定点诱变
（2）几种碱基变化的PCR引入
（3）PCR随机诱变（易错PCR）
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一、PCR定点诱变
应用PCR原理，可以直接进行定点诱变，并且不需要采用噬菌体M13.
首先，把需诱变的基因克隆于质粒上，把带有诱变目标基因的质粒，分成两个反应管，每个反应管加入不同的引物，每个反应管的一对引物中，有一个引物需按诱变意图改变碱基，即该碱基是错配的，每对引物的互补位置不同，同一管中每条几乎处于同一起点但放向相反。
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经PCR后，每个管产生了含有改变了特定碱基的产物，但留有缺口。因此，产物是线状的DNA链，由于引物互补位置不同，两个管的产物的缺口位置也不同，当把两个反应管的产物混合，经变性和退火处理，来自不同反应管的线状DNA链可杂交形成双链环状的DNA分子，但仍有缺口。由于环化分子可以转化大肠埃希菌，在体内可把缺口修复，这样可以获得定点改变了特低碱基的基因。
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1、重叠延伸PCR (over-lap extension PCR, OE-PCR )
2、大引物PCR法（megaprimer PCR )
3、环状诱变 PCR 法
4、TAMS 定点诱变技术
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1、重叠延伸PCR （OE-PCR）
首先设计两个PCR反应以产生两个含突变位点的DN***段，随后将上述两个PCR产物混合，二者通过末端互补区结合并在适宜的温度下互为引物延伸得到完整的含突变的基因，对第一次PCR产物进行纯化处理可显著提高突变效率
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2、大引物PCR法（megaprimer PCR )
先设置一个PCR反应产生一个含突变的DN***段，然后再以此DN***段作为引物与原模板退火进行PCR扩增得到含突变的完整的基因。因为作为引物使用的DN***段较通常的引物要大许多甚至有上百碱基，所以命名为大引物PCR法。
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大引物PCR 定点诱变技术路线
（圆点指突变位点）
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