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糖化酶的生产流程设计方案说明.docx


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糖化酶的生产流程设计方案
糖化酶即葡萄糖淀粉酶(1 ,4 - a-葡聚糖葡聚糖水解酶,
EC. 3. 2. ),是淀粉糖化工艺的主要酶类,被广泛地应用于 食品、医药、发酵等工业。目前,糖化酶的生产菌种主要为 黑曲霉。根 据使用的生产菌种不同及发酵工艺不同,工业生产中,糖化酶的发酵生产 水平在35 000〜55 OOOUPmL不等。糖化酶的工业化生产从过去的固 体发酵沿革到上世纪90年 代初,液体发酵工艺逐步取代了原固体发酵工 艺。液体发酵工艺的建立与应用极大地改善了发酵产品质量并大幅度提升 了糖化酶的发酵生产水平。但现有糖化酶发酵生产技术共同存在不足之 处,其中种子制备周期和发酵生产周期很长是一个较突出的问题,如实 验室的种子制备需要15d以上,发酵周 期通常200h以上。
生产流程图
试验菌种的分纯
1、培养基
(1)固体培养基,察氏培养基+1 %酵母膏+1 %蛋白陈;(2)初筛培
养基,玉米粉:效皮:米糠:硫酸***=7:3:2: (3)诱变后培 养基,玉米粉:数皮:米糠:硫酸***=8 : 3::2:,水
80ml。
(2)原料:玉米粉、秋皮等
(3 )菌种分纯
将秋皮采集菌种取出一部分,置入装有10mL生理盐水和若干玻璃 珠的小三角瓶内,振荡15分钟,将上清液一次稀释成10,、10〃、10 3,,29℃培养5~6天,分别挑取单个菌落接入 斜面,29℃培养一周。
以大连某厂的生产用菌B-11为对照,对分离菌株做摇床发酵试
验,96h后测定糖化力,配合镜检,确定诱变的出发菌株。
二、试验菌株的诱变
用生理盐水洗下成熟出发株的抱子、倒入5mL麦汁种1%酵母 膏 的三角瓶中,振荡L5h,使抱子活化,后3500r/ 钟,,再用缓冲液5ML洗转入小三角瓶 内(内有数枚无菌玻璃珠),振荡1。分钟,使抱子分散均匀,过滤,制 成单抱子悬浮液,将浓度调至个/ml
取10ml抱子悬浮液于9cm平板中,紫外线(UV)照射诱变2 分钟(避光操作),紫外线动率15W,室温,搅拌,照射距离30cm。
向经紫外线处理的菌液中加入硫酸二乙酯(DES)稀液(原液
1ml,95%乙醇4ml配制) ml,32℃恒温处理15分 不断摇动 钟,平皿,处理后立即稀释至IO”、10。(中止反应),〜 取涂平板,29℃培养5天后挑取单菌接入试管。摇床发酵
试验,优选出糖化力高的新菌株UD-7等。
三、糖化酶的制备
(一)材料:菌种:黑曲霉仪器:恒温培养箱离心机水浴锅恒温液体振 荡培养器小型液体发酵罐分光光度计等试剂:链霉素0・ 1%苯甲酸钠 乳酸氢氧化钠硫酸锈等
(二)设备
LRH-250型生化培养箱 上海一恒科技有限公司;TGL-16c型台式高速 离心机 上海安亭科学仪器厂;1086型精密水浴锅 德国GFL公司; HYG-II型退转式恒 温调速摇瓶机 上海新星自动化控制设备成套厂; UV-2100型紫外分光光度计UNICO (上海)仪器公司;LS-350L型立 式压力蒸气灭菌锅上

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  • 时间2021-08-03