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间接ELISA实验方法.docx


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文档列表 文档介绍
ELISA
一 实验材料
. 96孔酶标板
.TMB
二 实验试剂
包被液( ) :
Na2CO3 , ,加蒸馏水至 100ml。 4℃保存。
洗涤液 (PBST):
, KCl , NaCl , NaHPO・ , Tween-20 , 加去离子水至1000ml,- 。
底物反应液 :
底物缓冲液 :
, NaHPO- ,加蒸储水至100ml,充分溶解,置4c 保存备用。
底物反应液 :
OPDS色:称5mgOPD避光下加入10ml底物缓冲液,一般现配现用,
用时 5ml+8ul 30%H2O2。
TMBS色:预先配置10mg TMB/1ml DMSO?液5ml,避光4c保存,用 +100ul TMB/DMSO液+10ul 3%HQ避光,现配现用)
羊抗小鼠 IgG-HRP
三 实验步骤
包被:取抗原用包被液稀释至适合的包被浓度 , 根据所需的孔计算出
所需的包被液的量 , 每孔加 100ul , 37℃作用 1h 后 4℃过夜, 此步骤是将特异性
抗原与固相载体联结。
(2)封闭:次日取出酶标板用PBST1口满各孔洗涤3次每次五分钟,每次充 分拍干。然后每孔加入200ul的封闭液(1%BS域者5%兑脂孚L) , 37c作用2h, PBSia涤 3 次。
( 3)加一抗:按一定比例稀释相应的一抗,每孔加 100ul 稀释液。设置阴
性对照和空白对照,37 c作用1h, PBSTM涤3次。此步骤是加稀释受检血清, 使血清中的特异性抗体

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