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文档列表
文档介绍
ELISA
一 实验材料
. 96孔酶标板
.TMB
二 实验试剂
包被液（ ） ：
Na2CO3 ， ，加蒸馏水至 100ml。 4℃保存。
洗涤液 （PBST）:
, KCl , NaCl , NaHPO・ , Tween-20 , 加去离子水至1000ml,- 。
底物反应液 :
底物缓冲液 :
, NaHPO- ,加蒸储水至100ml,充分溶解，置4c 保存备用。
底物反应液 :
OPDS色：称5mgOPD避光下加入10ml底物缓冲液，一般现配现用，
用时 5ml+8ul 30%H2O2。
TMBS色：预先配置10mg TMB/1ml DMSO?液5ml,避光4c保存，用 +100ul TMB/DMSO液+10ul 3%HQ避光，现配现用）
羊抗小鼠 IgG-HRP
三 实验步骤
包被：取抗原用包被液稀释至适合的包被浓度 , 根据所需的孔计算出
所需的包被液的量 , 每孔加 100ul ， 37℃作用 1h 后 4℃过夜， 此步骤是将特异性
抗原与固相载体联结。
（2）封闭：次日取出酶标板用PBST1口满各孔洗涤3次每次五分钟，每次充 分拍干。然后每孔加入200ul的封闭液（1%BS域者5%兑脂孚L） , 37c作用2h, PBSia涤 3 次。
（ 3）加一抗：按一定比例稀释相应的一抗，每孔加 100ul 稀释液。设置阴
性对照和空白对照，37 c作用1h, PBSTM涤3次。此步骤是加稀释受检血清， 使血清中的特异性抗体
一 实验材料
. 96孔酶标板
.TMB
二 实验试剂
包被液（ ） ：
Na2CO3 ， ，加蒸馏水至 100ml。 4℃保存。
洗涤液 （PBST）:
, KCl , NaCl , NaHPO・ , Tween-20 , 加去离子水至1000ml,- 。
底物反应液 :
底物缓冲液 :
, NaHPO- ,加蒸储水至100ml,充分溶解，置4c 保存备用。
底物反应液 :
OPDS色：称5mgOPD避光下加入10ml底物缓冲液，一般现配现用，
用时 5ml+8ul 30%H2O2。
TMBS色：预先配置10mg TMB/1ml DMSO?液5ml,避光4c保存，用 +100ul TMB/DMSO液+10ul 3%HQ避光，现配现用）
羊抗小鼠 IgG-HRP
三 实验步骤
包被：取抗原用包被液稀释至适合的包被浓度 , 根据所需的孔计算出
所需的包被液的量 , 每孔加 100ul ， 37℃作用 1h 后 4℃过夜， 此步骤是将特异性
抗原与固相载体联结。
（2）封闭：次日取出酶标板用PBST1口满各孔洗涤3次每次五分钟，每次充 分拍干。然后每孔加入200ul的封闭液（1%BS域者5%兑脂孚L） , 37c作用2h, PBSia涤 3 次。
（ 3）加一抗：按一定比例稀释相应的一抗，每孔加 100ul 稀释液。设置阴
性对照和空白对照，37 c作用1h, PBSTM涤3次。此步骤是加稀释受检血清， 使血清中的特异性抗体
间接ELISA实验方法 来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.
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