关节软骨细胞诱导骨髓间充质干细胞向软骨样细胞分化研究.pdf

福建医科大学
硕士学位论文
关节软骨细胞诱导骨髓间充质干细胞向软骨样细胞分化的研究
姓名:刘晓强
申请学位级别:硕士
专业:外科学(脊柱关节外科)
指导教师:陈宗雄
20100301
关节软骨细胞诱导骨髓问充质干细胞向软骨样细胞分化的研究中文摘要目的:掷搿⑴嘌凹ü撬柙葱约涑渲矢上赴珺⒒袢「叽慷鹊腂;掷搿⑴嘌鉴定关节软骨细胞珹⒒袢「叽慷鹊腁;与餐嘌盏迹⒓觳馄溆盏冀峁对共培养生物诱导与в盏嫉慕峁斜冉稀方法:袢〔⑴嘌⒃鲋掣叽慷裙撬栉食渲矢上赴捍覵笫芰的股骨及胫骨干中取得骨髓,联合利用密度梯度离心法及差异贴壁法分离、纯化逋饫┰霾⒋ù螅嗖钕晕⒕迪鹿鄄煜赴男翁傲魇较赴羌觳庀胞表面标记:、、及,再通过成脂肪样、成骨样及成神经样细胞多向分化诱导,检测其诱导结果,确定所得细胞为O乱徊绞笛榇蛳基础。袢〔⑴嘌⒃鲋掣叽慷鹊墓亟谌砉窍赴捍覵笫芰的正常股骨头表面取得关节软骨片,,当相差显微镜下见有大量软骨细胞游离后,离心、弃上清液,加入含%娜砉窍赴嘌航信嘌⒗┰龃ù⑷⊙刑ㄅ卫度旧ḿ剖当细胞传至第三代时,运用甲苯胺蓝染色及染色检查、鉴别该细胞,确定所得细胞为关节软骨细胞,为下一步实验打下基础。与赥共培养:分别吸取第三代虯,按的细胞比例分别植于培养系统中,下室植入鲜抑踩階,同时设置相同浓度单独瞻对照组,分别在用含%母咛荄嘌嘌嗖钕晕⒕迪鹿鄄煜赴增殖和基质合成情况,并对各组细胞爬片进行型胶原免疫组化染色检查。共培养生物诱导与в盏嫉谋冉希航獴用于诱导,同时与,,亟谌砉窍赴築ǘ鹊南赴才嘌导组比较对照。并运用壬ǚḿ觳椤被厶含量检测及检测各组细胞型胶原基因表达量,确定其诱导情况。结果:袢〔⑴嘌⒃鲋掣叽慷菳:相差显微镜下观察结果:原代细胞接种罂杉糠窒赴冢后细胞大量贴壁,外观呈现纺锤形或多角形。笙赴靠J荚龆啵蟛糠窒赴翁食に笮巍⑺瞥上宋赴E嘌/福建医科大学硕士论文
笥蚁赴搪嘌康状プ笥遥赴始耘帕校糠旨淇沙输鑫凶础细胞表面标记物经流式细胞仪检测结果:坏乇泶顲癈粜月接种罂J继冢完成贴壁。原代培养的试残渭岸嘟切危岣唬胞核圆形,居中,细胞长成一片可呈明显的铺路石样外观,与长梭形的成纤维细胞较易区分。试验证明:经本方法消化培养后仅见单一的软骨细胞生长。与才嘌汗才嘌锽数量增多,细胞外基质合成丰富,其基质能被型胶原免疫组化染色,细胞染色呈现黄色。才嘌镉盏加隩导的比较:共培养细胞生物诱导的比色法检查、氨基聚糖考觳饧癐型胶原检测结果显示:各组细胞共培养诱导结果均不差于/膌化学诱导结果,但簂、共培养组诱导统计结果差异不明显。芏忍荻壤胄暮筒钜焯诜ǹ梢曰袢〈慷冉细叩腂:高纯度的梢跃鹊鞍酌浮徒涸噶:舷螅恕⒗胄摹⑴%:而和为阴性,%。成脂肪样、成骨样及成神经样细胞诱导均获得成功。袢〔⑴嘌叽慷鹊腲:运用上述方法可获得一定纯度的T诘怪孟嗖钕晕⒕迪鹿鄄旆⑾郑喝砉窍赴в结论:与才嘌勺魑P薷垂亟谌砉堑闹肿酉赴关键词:骨髓间充质干细胞亟谌砉窍赴鸗共培养型胶原免疫组化福建医科大学硕士论文
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英文缩写英文全称染色中文全称骨髓间充质干细胞转化生长因子一谆邕蛞,苯基四氮唑溴盐氨基聚糖特异性烯醇化酶谷胱甘肽苏木精一伊红染色磷酸盐缓冲液缩略词表关节软骨细胞,籇一粂一一胎牛血清福建医科大学硕士论文。。—。
虹年』月日作者签名中:旦丛私年—』月』年—堕月—.上日学位论文原创性声明和版权使用授权书学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的真实成果。除文中已注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本论文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权福建医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ导师签名中:Ⅵ作者签名中:妒~福建医科大学硕士论文
前骨髓源性间充质干细胞珺于分离、培养,且具有多向分化能力,能够分化为中胚层的多种细胞‘冢壳已成为具有广阔应用前景的干细胞之一。年后,国内练克俭等“τ霉撬细胞移植进行修复关节软骨的实验研究,他们以自制骨基质海绵为载体,在不进行分化诱导及筛