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选修《生物技术实践》知识点归纳
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2021选修1?生物技术实践?知识点归纳
实验1 大肠杆菌的培养和别离
、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞构造的低等生物，包括病毒、原核生物、原生生物和某些真菌。细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁〔肽聚糖〕、细胞膜、细胞质，无成型的细胞核，只有一环状DNA分子〔拟核〕。以分裂〔二分裂〕的方式繁殖，分裂速度很快。用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌〔革兰氏染液染色后，再脱色处理，细菌仍保存染色液的颜色〕和革兰氏阴性菌两大类，区别在细胞壁的成分不同。大肠杆菌是革兰氏阴性〔细胞壁薄，有荚膜〕、兼性厌氧的肠道杆菌。
：划线别离法和涂布别离法。是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。
划线别离就是用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线的过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少，。划线最后，可使细菌间的距离加大。将接种后的固体培养基培养10～20小时后，一个细菌细胞就会繁殖成许多细菌细胞，形成菌落，不会重叠。在斜面上划线，那么每个斜面的菌群就是有一个细菌产生的后代。用于基因工程的大肠杆菌的工程菌，可以用划线别离法获得产物表达能力高的菌株。由于工程菌的质粒中通常有抗性基因〔如抗氨苄青霉素基因〕，如在培养基中参加一定量的氨苄青霉素，由于非工程菌的其他杂菌都没有抗性基因，所以在划线后只有存在抗性基因的工程菌能生存下来。
涂布别离时，需要先将培养的菌液稀释，通常稀释到10-5～10-7之间，，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进展培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。通常每个培养皿中有20个以内的单菌落为最适宜。
划线别离法，方法简单；涂布别离法，单菌落更易分开，但操作复杂。
，必须进展无菌操作。其首要条件是各种器皿必须是无菌的，各种培养基也必须是无菌的，转移培养基、倒平板、接种、平板划线、平板稀释涂布等操作中的每一步都要做到无菌〔防止杂菌污染〕。进展恒温培养时，要将培养皿倒置，是因为培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿会使水蒸气凝结成水滴后，落入培养基的外表并且扩散，菌落中的细菌也会随水扩散，菌落见相互影响，很难在分成单菌落，达不到别离的目的。
〔通用培养基、常用于做生理学研究和发酵工业〕，划线别离要用LB固体培养基〔常用于微生物别离、鉴定、计数和菌种保存〕。“细菌喜荤，霉菌喜素〞，通常细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要参加一定的***