氨基酸分析实验报告(精).doc

生物化学实验报告姓名: 学号: 专业年级: 组别: 生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称氨基酸的薄层层析实验日期 2014- 1 0- 22 实验地点第4 实验室合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的 。 。 ( R f值)来鉴定被分离的物质(即氨基酸混合液)。二、实验原理(一)薄层层析 (如溶解度、吸附能力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)的不同,使各组分不同程度地分布在两相中,随着流动相从固定相上流过,不同组分以不同速度而最终被分离。 1)特点:分离效率高,能分离各种性质相类似的物质。不仅可用于少量物质的分离纯化,也可用于大量物质的分离纯化和制备。 2)固定相:固定相是层析的一个基质。包括固体物质(如吸附剂,凝胶,离子交换剂等)和液体物质(如固定在硅胶或纤维素上的溶液),这些物质能与相关的化合物进行可逆性的吸附、溶解和交换作用。 3)流动相:在层析过程中,推动固定相上待分离的物质移动的液体、气体等, 都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂,薄层层析时称为展层剂。 4)分类(1 )按两相所处状态,可分为液相层析和气相层析,前者以液体为流动相,后者以气体为流动相。(2)按操作形式不同,可分为柱层析、薄层层析和纸层析。(3 )按层析的原理不同,可分为吸附层析、分配层析、凝胶层析、离子交换层析和亲和层析等。今天要做的试验,根据原理属于吸附层析,根据操作形式又属于薄层层析,合到一起叫:吸附薄层层析。 。当液相(展开溶剂)在固定相上流动时,由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样,不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样,点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同,因而可以彼此分开。(即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行,而将样品各组分分离开来) 1)吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶: 硅胶:表达式为 SiO2 · XH2O 。层析用硅胶是一种多孔性物质,它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基( - Si- OH ) ,)硅胶吸附薄层层析的特点: (1)硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱,其吸附活性也与含水量呈负性相关。(2)硅醇基显较弱的酸性,因而,硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离, 碱性成分不能用它分离。(3)硅胶的活化温度通常为 105 ℃- 110 ℃,不能过高。(二)氨基酸与茚三***的显色反应茚三***水化后生成水化茚三***,它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三***、氨基醛,与此同时,还原茚三***又与氨基茚三***缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。(三) 混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率—R f值( rate of flow )来表示。层析中,物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为 R f 值。由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的,故移动速率( R f值)也是恒定的,因此可以根据 Rf值来鉴定被分离的物质。三、材料与方法: (一)实验材料 1)分析样品:氨基酸混合液 2)吸附剂:硅胶 3)粘合剂: