游离脂肪酸对非洲绿猴肾细胞凋亡的影响.pdf

摘要游离脂肪酸作为能量代谢来源、细胞膜生物合成的原料以及细胞内信息转导物质(如前列腺素、白细胞诱素和血小板激活因子等)的前体物质,对于细胞生物功能有重要意义。而生物体内环境的稳定,不但依赖细胞增殖和分化,也依赖于细胞的凋亡。,脂肪酸的代谢异常将会导致细胞的功能障碍,能够引起细胞的凋亡。由于相关凋亡基因和蛋白的表达在此过程中发生了显著的变化,也证实了游离脂肪酸的这种作用与细胞凋亡密切相关。新近的研究结果表明,不同种类、结构的脂肪酸对于不同类型细胞会产生不同的影响,即使是对于相同细胞也有不同的作用。临床疾病如糖尿病等均与脂肪酸异常升高有关;此外脂肪酸能引发乳腺癌细胞等肿瘤细胞的凋亡。近年来,国内外学者就脂肪酸对细胞的作用以及可能机制做了大量的研究。其重要研究目的在于阐明凋亡和疾病的关系,了解疾病发病机理从而应用摘亡理论和实践来预防疾病。但目前,国内相关研究报道尚不多见。本实验选用非洲绿猴肾(Vero)细胞作为研究对象,探讨脂肪酸对细胞生长的影响。利用不同种类不同浓度脂肪酸处理体外培养细胞,利用光镜观察细胞形态,后经Hoechst/Pl荧光染色和染色体DNA梯度电泳观察细胞形态改变并确定细胞凋亡:同时应用蛋白免疫印迹反应检澳l凋亡相关Bcl-2、Bax、Fas、P53和Caspase-3 蛋白质表达水平。实验结果: (1)光镜观察显示:细胞经脂肪酸处理后有形态上的改变,细胞产生不同程度的破损,这种损坏程度随脂肪酸浓度递增而加强。(2)HoechsffPI染色表明:饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸都可剂量依赖性的引起Vero_细胞凋亡。随浓度升高,PI着色加深,染色质边集;Hoechst着色渐淡。(3)DNA凝胶电泳显示:经腊肪酸处理的细胞DNA呈明显的梯度分子条带,。(4):脂肪酸处理的细胞中,Bcl-2、Bax、Fas、Caspase-3蛋白表达量发生改变,其中Bax、Fas蛋白表达量随浓度增加而显著上调,同时,:另外,饱和脂肪酸处理组中P53蛋白表达并无太大差异,而不饱和脂肪酸组P53含量以剂量依赖性上升。实验结果表明,随着脂肪酸浓度的升高,Vero细胞的凋亡程度有所增加,有明显凋亡现象。由于Bcl-2、Bax、Fas、Caspase一3和P53蛋白表达发生变化,提示,这些相关基因在脂肪酸诱导的Vero细胞凋亡过程中起到了重要的作用。关键词脂肪酸;Western,blot;梯度电泳;细胞凋亡 THE EFFECTS 0F FREE FATTY ACIDS 0N APOPTOSIS INVERO CELLS Abstract Free fatty acids serving as a source ofmetabolic energy,the substratesfurcellmembrane biogenesis,and theprecursors ofmany intracellularsignaling moleculessuch as POs,leukotrienes, thromboxanes,platelet-activating factor,and SO on,played animportant roleinthecellular biological ofbiological conditions depended 0n not cellproliferation and differentiation,but involved inmetabolic processes ofcellandtissue,which adjusted by many of FFA metabolism usually caused tofunctional obstacles, and apoptosis can and proteins associated with apoptosis went through significant changes,which suggested such afunction offreefatty acidsWas deep associated with the concrete mechanism hadn’ researches showed that FFAs with various