血糖的测定及激素对血糖浓度的影响.ppt

血糖的测定及激素对血糖浓度的影响
一 实验目的
掌握GOD-POD法测定血糖的原理及方法。
观察胰岛素，肾上腺素对血糖浓度的影响。
了解动物实验的基本知识和兔耳缘静脉取血的方法。
二 原理
(2) 激素对血糖浓度的影响
葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下生成葡萄糖酸，并产生过氧化氢，过氧化氢被过氧化物酶（POD）催化释放初生态氧，氧又对与色原性氧受体4－氨基安替比林偶联的酚氧化，并与4－氨基安替比林结合生成红色醌类化合物。
二 原理
(2) 显色原理
葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下生成葡萄糖酸，并产生过氧化氢，过氧化氢被过氧化物酶（POD）催化释放初生态氧，氧又对与色原性氧受体4－氨基安替比林偶联的酚氧化，并与4－氨基安替比林结合生成红色醌类化合物。
葡萄糖＋O2+H2O GOD 葡萄糖酸＋H2O2
4－氨基安替比林＋酚＋H2O2 POD 红色醌类化合物 +4H2O

葡萄糖越多，生成的醌类物质就越多，颜色就越深，通过所讲过的比色法，求出它的葡萄糖含量，即血糖浓度。（标准管法）
三 操作
1．准备抗凝试管：首先放入试管一小勺抗凝剂（草酸钠）。
2．分组。称重：Kg，共有四只兔子，两只注射胰岛素，两只注射肾上腺素。兔子抓取方法：一手抓取颈部皮肤，另一只手托臀部，把它放在天平上称重。
操作
3. 注射前取血:一般多以心脏取血的方式进行。
操作
4．注射激素:抓住兔子，肚皮朝上，在腹部的皮下注射，注意要抓紧兔耳以免被咬住，方法是掂起皮肤，刺入皮下有落空感，然后缓慢注入激素。 mg/kg（注意记录时间） mg/kg，并记录时间。
5．制备无蛋白血虑液:这是注射前的血液，在胰岛素等待一个小时，肾上腺素等待半个小时期间制备注射前无蛋白血虑液。方法：蛋白沉淀剂4ml＋，室温放置7分钟后，在漏斗上过滤，这时标记为注射前无蛋白血滤液。
操作
6．注射后再次取血
7．再制备无蛋白血虑液:标记为注射后
8．比色：最后我们用标准管法来测定血糖浓度， 按表操作：
混匀，置37℃水浴15分钟调波长为505nm，以空白管调零，分别读取A测A标,根据标准管法求测定管血糖浓度。
加入物（ml） 测定管（注射前） 测定管（注射后） 标准管 空白管
去蛋白血滤液
处理后的葡萄糖
标准应用液
蛋白沉淀剂
酶酚混合试剂 3 3 3 3