细胞计数板使用方法计划.docx

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细胞计数板使用方法
实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时， 通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。具体操作：
将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。
将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置 3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。
计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算：细胞数 /mL=四大格细胞总数 /4 × 104
说明：公式中除以 4，因为计数了 4 个大格的细胞数。
公式中乘以 104 因为计数板中每一个大格的体积为：
（长）× （宽）× （高） = 而 1ml=1000mm3
（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团， 应按单个细胞计算， 若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液）
细胞计数板的使用
血球计数板 - 基本构造
血球计数板是一块特制的厚型载玻片， 载玻片上有四个槽构成三个平台。 中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，
每个方格网共分九个大格， 中央的一大格作为计数用， 称为计数区。 计数区的刻度有两种：一种是计数区分为 16 个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成 25 个小方格；另一种是一个计数区分成 25 个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成 16 个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由 400 个小方格组成。
1 专业技术分享
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计数区边长为 1mm，则计数区的面积为
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1mm，每个小方格的面积为
1/400mm。盖
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上盖玻片后，计数区的高度为 ，所以每个计数区的体积为 ，每个小
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方格的体积为 1/4000mm。
使用细胞计数板计数时， 先要测定每个小方格中微生物的数量， 再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。
细胞计数板 - 使用方法
1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释 100 倍），以每小格
的菌数可数为度。
2．取洁净的细胞计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生， 并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。 也可以将菌悬液直接滴加在计数区上 （不要使计数区两边平台沾上菌悬液， 以免加盖盖玻片后， 造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
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