蛇葡萄素对hepg2和k562细胞生长抑制和凋亡作用的研究.pdf

中山大学
硕士学位论文
蛇葡萄素对HepG2和K562细胞生长抑制和凋亡作用的研究
姓名:侯娟娟
申请学位级别:硕士
专业:药理学
指导教师:刘德育
20050501
凋亡作用的研究摘要蛇葡萄素对蚄赴ひ种坪研究背景和目的专业:硕士研究生:导师:药理学侯娟娟刘德育教授黄酮类化合物广泛存在于自然界各种药用植物和水果蔬菜中,有望发展成为新‘目怪琢鲆┪铩I咂咸阉厥窃辽咂咸鸦蛳猿萆咂咸阎刑崛〉幕仆@嗷衔铮有消炎解毒的功效。刘德育等采用经改进的甲醇提取、水重结晶法提取分离得到蛇葡萄素,研究发现其对酪氨酸酶活性有明显的抑制作用,进一步研究发现对小鼠赴忻飨缘囊种谱饔谩>改甑囊幌盗锌怪琢鍪笛椋⑾稚咂咸阉卦谔逋对人白血病一、、人鼻咽癌.⑷巳橄侔㎝一戎琢鱿赴暧邢灾的生长抑制作用,并可以诱导肝癌赴蛲觯辉谔迥诙訡/∈驜黑色素瘤和人肺癌闶笠浦擦鲇邢灾纳ひ种谱饔谩=暧址⑾稚咂咸素对牛主动脉内皮细胞的增殖、赴置诘腣幸种谱饔茫对裸鼠移植性赴灿幸至鲎饔茫訦写俳蛲龅淖饔谩F渌难究者发现藏药金腰草中黄酮能诱导细胞凋亡,芒果甙对也有抑制增殖促进凋亡的作用,槲皮素及金雀异黄索可诱导细胞凋亡,槲皮素还具有诱导人肝癌细胞牡蛲龅淖饔谩i纹に睾蜕咂咸阉亟峁瓜嗨疲由鲜龅难芯拷峁及参考文献可以推测蛇葡萄素可能具有诱导癒赴蛲龅淖饔谩R虼耍本课题的目的是从蛇葡萄素抑制蚄赴と胧郑鄄焐咂咸阉囟粤蛇葡萄素对蚄赴ひ种坪唾猛鲎饔玫难芯巾山大学一
方法结果种细胞罢呤鞘堤辶鱿赴笳呤欠鞘堤辶鱿赴在抑制生长和凋亡作用中的不同,并尝试通过体内实验来观察蛇葡萄素对赴ひ种谱纯觥F湟庖迨俏不同细胞对蛇葡萄素抗肿瘤敏感性和特异性奠定科学基础,同时也为蛇葡萄素早日开发奠定理论基础。逋馐笛应用ú舛ú煌ǘ壬咂咸阉囟訦和细胞生长的影响,计算抑制率和,。,同时,观察是否存在时间和剂量依赖性。应用荧光染色进行蚄赴翁笛椋鄄焓欠翊嬖诘蛲觥采用碇悄旱缬竟鄄煲┪锎砗蟮腍和细胞浠察有无凋亡特异性的条带出现,并观察有无时间和剂量依赖性。通过流式细胞仪来分析蚄赴芷诤偷蛲雎剩鄄焓欠翊嬖谑奔浜剂量依赖性。痗纯系裸小鼠移植人肝癌赴P停肿楦鄄煲┪锒砸植肿瘤的生长抑制作用和瘤组织的超微结构变化。煌ǘ鹊纳咂咸阉囟訦细胞有不同的增殖抑制作用,且呈明显的剂量和时间依赖性关系。蛇葡萄素在体外浓度为、、、、、处理时间为保訦细胞的抑制率分别为.±%、蛇葡萄素对蚄赴ひ种坪吞屯鲎饔玫难芯/中山大学Ⅱ
%、%,半数抑制浓度为/F腎直鹗.、.、.荧光显微镜观察到蛲鱿赴颂寤湫。旧ú痪龋四诔氏峙ㄈ局旅的颗粒块状荧光,有的核碎裂成两块或几块的现象,有明显的剂量依赖性。碇悄旱缬痉⑾諬细胞经药物处理蠹纯杉降湫偷牡蛲鎏状条带:浓度为、/硐赴缶杉湫吞葑刺醮ǘ越高,亮度越强,呈剂量依赖性:/院驞条带呈弥散坏死状改变。通过流式细胞术发现不同浓度的蛇葡萄素均可诱导赴蛲觯~/蛲雎室欢ㄅǘ确段~/呈剂量依赖性特征,超过凋亡率没有多大改变;浓度为笾饕R曰邓牢V鳌Eǘ任在蛲雎蚀镒罡呶ィ壹飨缘膕—濉煌ǘ鹊纳咂咸阉囟訩赴胁煌脑鲋骋种谱饔茫页拭飨缘募亮亢褪间依赖性关系。蛇葡萄素在体外浓度为.、、、、.±%,半数抑制浓度琻的;。分别是.、.荧光显微镜观察到凋亡细胞核体积变小,染色不均匀,核内呈现浓染致密的颗粒块状荧光,有的核碎裂成两块或几块的现象,有明显的时间和剂量依赖性。碇悄旱缬痉⑾諯赴┪锎蠹纯杉降湫偷牡蛲鎏葑条带:浓度为、、、/硐赴缶杉湫吞葑刺醮/蛇葡萄素对蚄赴ひ种坪桶仆鲎饔玫难芯ァ,±%、.ァ.±%、.//%、.ァ.±%、ァ.±%、中山大学
结论度越高,亮度越强,呈剂量依赖性:/院驞条带呈弥散坏死状改变。通过流式细胞术发现不同浓度的蛇葡萄素均可诱导细胞凋亡,从/蛲雎食拭飨缘氖奔浜图亮恳览敌蕴卣鳎ǘ任坏死为主。浓度为/蛲雎蚀镒罡呶ィ壹飨缘膕—獺细胞接种/肯德阈∈缶北巢科は周后,只小鼠均有肿瘤的发生,瘤内给药天后处死动物剥除肿瘤称重,溶剂组只琢鯫..±呒亮孔肿瘤R至雎实图亮孔,中等剂量组.%.呒亮孔。咂咸阉卦谝欢ㄅǘ确段诙匀烁伟┫赴鸋细胞的增殖具有显著抑制作用.⒕哂惺奔浜图亮恳览敌裕浩、、腎直鹗.、荧光染色凋亡细胞核出现浓染和颗粒状荧光,蛇葡萄素在体外可以诱导细胞凋亡,碇悄旱缬居刑匾煨缘蛲鎏荽鱿郑魇较赴跤忻飨缘狦峰出现,并存在时间和剂量依赖性。咂咸阉卦谝欢ㄅǘ确段诙匀寺粤O赴园籽2∠赴鸎脑鲋尘哂邢灾抑制作用.⒕哂忻飨允奔浜图亮恳览敌裕黄分别是.、.、和蛇葡萄素在体外可以诱导细胞凋亡,荧光染色凋亡细胞核出现浓染和颗粒笾饕R峰。蛇葡萄素对蚄赴ひ种坪偷蛲鲎饔玫难芯//Ⅳ中山大学/。
关键词:蛇葡萄素,赴琄赴蛲觥状荧光,,并存在时间和剂量依赖性。ü烁伟┫赴鸋裸鼠移植瘤模