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字号:大中小第一节结缔组织和肌纤维染色 Van Gieson 苦味酸酸性复红法(VG 法) 用途: VG 法用于区分胶原纤维和肌纤维。原理: 酸性复红和苦味酸对这两种纤维都具有较强的亲合力, 结果胶原纤维被酸性复红染成红色,肌肉被苦味酸染成黄色。此方法是一种优良的传统方法。固定: 10% 福尔马林切片: 4-6 微米试剂: Weigert 铁苏木精液: A液: 苏木精 1g , 无水酒精 100 ml 。一般配制后需要数周或数月自然氧化, 成熟后使用。 B 液: 29% 三***化铁水溶液 4 ml ,蒸馏水 95 ml ,盐酸 1 ml 。两液分别配制,临用时 A、B 液等量混合,过滤后使用。 24h 后失去染色能力。 Van Gieson 液: 1% 酸性复红水溶液 10 ml 苦味酸饱和水溶液 90 ml 临用时 1:9 混合过虑后使用。 Van Gieson 苦味酸酸性复红法(VG 法) 步骤: 1. 石蜡切片脱蜡至水。 2. Weigert 苏木精液 5-10 min 。 3. 充分水洗。 4. Van Gieson 液 1-5 min 。 5. 95% 酒精迅速分化数秒。 6. 无水酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。结果:胶原纤维呈红色、肌肉、神经胶质、胞浆、红血球呈黄色、细胞核呈黑色或棕蓝色。体会与说明: 由于酸性复红退色较快,染色结果不能长期保存,一般只能保存 3~6 个月。二 Masson 三色法试剂: Regaud 氏苏木精: 苏木精 1g , 95% 酒精 10ml ,甘油 10ml ,蒸馏水 80ml 。将苏木精加入蒸馏水内加温溶解, 冷却后加入酒精和甘油, 放数日后即可应用。 Masson 丽春红酸性复红液: 丽春红 , 酸性复红 , 蒸馏水 99ml , 冰醋酸 1ml 。 % 冰醋酸水溶液: 冰醋酸 ml ,蒸馏水 100 ml 。 1% 磷钼酸水溶液: 磷钼酸 1g ,蒸馏水 100 ml 。苯***蓝水溶液: 苯***蓝 2g ,蒸馏水 98 ml ,冰醋酸 2 ml 。 1% 光绿水溶液: 光绿 1g ,蒸馏水 100 ml 。 Masson 三色法步骤 1. 石蜡切片脱蜡至水。 2. 铬化处理或去***盐沉淀(甲醛固定的组织此步可略)。 3. 依次自来水和蒸馏水洗。 Regaud 苏木精染液或 Weigert 苏木精液染核 5-10min 。 5. 充分水洗, 如过染可盐酸酒精分化。 6. 蒸馏水洗。 Masson 丽春红酸性复红液 5-10min 。 2% 冰醋酸水溶液浸洗片刻。 9. 1% 磷钼酸水溶液分化 3-5min 。 10 . 不经水洗, 直接用苯***蓝或光绿液染 5min 。 11 .以 % 冰醋酸水溶液浸洗片刻。 12 . 95% 酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固。结果: 胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色( 如光绿液染色为绿色), 胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色,胞核黑蓝色。体会与说明: 1 .控制好染色步骤。 2 .组织固定起着很重要的作用,根据不同的固定液可延长或缩短染色时间。 3. % 冰醋酸水溶液洗,可使色调清晰鲜艳。 4 .磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用,分化时镜下控制, 肌纤维和纤维素呈红色,胶原纤维呈淡粉红色即可。弹力纤维染色 Schmorl 染色法石炭酸- 品红液: 碱性品红 2g ,无水酒精 50ml ,熔化石炭酸 25ml ,在 37 ℃温箱过夜, 冷后过滤。 Weigert 间苯二酚- 品红液: 碱性品红 1g , 间苯二酚( Resorcin ) 晶体 2g , 蒸馏水 100ml 。在锥形烧瓶内煮沸,加 29% 三***化铁水溶液 搅拌并继续煮沸 2-5mine 。冷后过滤,烘干滤纸及沉淀,放入烧瓶并加 95% 酒精 100ml 在水浴加温至染料全溶解,待冷却后过滤,并补足因加热蒸发的酒精至 100ml 。最后加浓盐酸 2ml 摇匀备用。弹力纤维 Schmorl 染色法步骤 1. 石蜡切片脱蜡至水。 2. 石炭酸- 品红液 37 ℃染 1h ,或室温 24h 。 3. 70% 酒精漂洗。 4. Weigert 间苯二酚- 品红液染色 20-30min 。 5. 无水酒精分色约 1/2h ,如染色过度也可改用 % 盐酸的 95% 酒精分色。 6. 流水冲洗后换蒸馏水漂洗。 7. 常规苏木精染核 5-10min 。 8. 水洗。 9. Van Gieson 液复染 3-5min 。 10 . 蒸馏水洗。 11 . 酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。结果:弹力纤维蓝黑色,胶原纤维红色,肌纤维黄色,细胞核蓝色弹力和胶原纤维染色法试剂: 维多利亚蓝染色液: 维多利亚蓝(