下载此文档

重组基因的导入和鉴定.ppt


文档分类:医学/心理学 | 页数:约71页 举报非法文档有奖
1/71
下载提示
  • 1.该资料是网友上传的,本站提供全文预览,预览什么样,下载就什么样。
  • 2.下载该文档所得收入归上传者、原创者。
  • 3.下载的文档,不会出现我们的网址水印。
1/71 下载此文档
文档列表 文档介绍
重组基因的导入和鉴定
*
第一页,共71页
构建重组体DNA是分子生物学常用技术。它把经过处理的、具有匹配末端的外源片段和载体进行连接,转化感受态细菌后,经生长、筛选或鉴定,获得含目的DNA 的转化菌。本章讨论外源重组基因转入受体细胞的方法,及其重组子的鉴定。
*
第二页,共71页
第一节 基因转移的方法
在确定染色体DNA是遗传的主要载体后的一段较长时间内,人们一直认为虽然生物种类繁多,表型各异,但决定每种生物基因组的DNA是固定的,包括数目固定、位置固定、功能固定的一系列基因。他们的流动性受到十分严格的限制。
*
第三页,共71页
随着遗传学研究的深入,人们逐渐发现细菌的结合、转导、转化、转座等现象,在这些事件中存在明显的遗传物质转移,而这种转移与生物繁殖过程中的遗传物质的转移有显著区别。这些现象后来成为基因工程的基因转移技术。可以用于细菌、真菌和动、植物的基因工程体构建。
*
第四页,共71页
一、基因转移的物理方法
裸DNA直接注射
微粒轰击
电穿孔
显微注射
物理方法
*
第五页,共71页
(1)裸DNA直接注射
1990年Wolff等首次注意到给小鼠直接肌肉注射纯化的DNA或RNA重组表达载体,可使载体上的基因在局部肌细胞内表达,这种表达可持续数日或更长时间,且没有检出注射的外源核酸与宿主染色体整合。
随后的大量动物实验都说明在合适的条件下,DNA接种后可诱导机体产生细胞及体液免疫。于是,作为一种新的基因治疗手段——核酸免疫技术应运而生。
*
第六页,共71页
*
第七页,共71页
*
第八页,共71页
*
第九页,共71页
提高转化效率措施
实验表明,横纹肌细胞(如心肌、骨傍肌)和胸腺滤泡细胞摄取DNA的能力较强,但实际上质粒DNA注射入肌组织后,最多只有1%-2%的肌纤维被转染,DNA的转染效率不仅与质粒DNA的大小、构型有关,还与肌细胞的状态有十分密切的关系。
人们为提高肌细胞摄取DNA的能力采取了一些措施,如在质粒接种前先给予高渗蔗糖溶液、心肌毒柬或麻醉剂(如利多卡因)的预处理。
*
第十页,共71页

重组基因的导入和鉴定 来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.

相关文档 更多>>
非法内容举报中心
文档信息
  • 页数71
  • 收藏数0 收藏
  • 顶次数0
  • 上传人文库新人
  • 文件大小4.71 MB
  • 时间2021-10-25