食品中铜绿假单胞菌检测.ppt

食品中铜绿假单胞菌检测
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铜绿假单胞菌可由多种途径传播，但主要是通过污染医疗器械、用具及带菌医护人员引起医源性感染，因此，对烧伤病房、手术器械及治疗器械应进行严格消毒灭菌，以保证无铜绿假单胞菌的污染。对铜绿假单胞菌感染的治疗，可应用庆大霉素、多粘菌素B和羧苄青霉素。
铜绿假单胞菌抵抗力较其他革兰阴性菌强，56℃1h可杀灭，对很多抗生素具有耐受性。对消毒剂、干燥、紫外线等理化因素及不良环境抵抗
力强，对化学药物的抵抗力比一般革兰氏阴性菌强大。
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二、生物学特性
1. 培养特性
本菌属于假单胞菌属，是一种
非发酵革兰阴性无芽孢杆菌，菌体
细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或
短链状排列。菌体的一端有单鞭毛，在暗视野显
微镜或相差显微镜下观察可见细菌运动活泼。
2．菌体形态
无芽孢，无夹膜，革兰阴性杆菌，有单鞭毛或丛鞭毛，运动活泼。～1µm×～µm，菌体笔直或弯曲。
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3、生化特性
氧化酶和过氧化氢酶阳性。O/F试验为氧化型，还原***盐为亚***盐，分解乙酰***产生氨。
98 ％菌株产生水溶性荧光色素。铜绿假单胞菌能液化明胶，酪蛋白水解，但淀粉不水解。90 ％以上的菌株产生蓝绿色色素。
分解蛋白质能力强，发酵糖类能力较低，氧化分解葡萄糖，产酸不产气，不分解甘露醇、乳糖及蔗糖，能液化明胶，分解尿素，不形吲哚，氧化酶试验阳性，还原***盐产气，靛基质阴性，不产硫化氢。
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三、致病性
• 主要致病物质是内***，此外尚有菌毛、荚膜、胞外
酶和外***等多种致病因子。可引起局部化脓性炎症
，也可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎、胃肠炎、心内
膜炎 、脓胸，还可引起菌血症、败血症及引起婴儿严
重的流行性腹泻。
• WHO的HACCP评估明确指出铜绿假单胞菌是婴儿瓶装
饮用水的危害指示菌，可造成婴儿腹泻。尤其是抵抗
力较差的老弱病幼孕人群，饮用含铜绿假单胞菌的瓶
装水很可能导致疾病的发生，患者食入103~104个菌体细
胞即可被侵害。铜绿假单胞菌的生长还将增加亚***
盐的含量-参考文献。
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国内外污染情况- 参考文献
• 国内污染情况：
-％～％；
-％。
• 国外污染情况：
-Richards等在104件检品中的4件分离到铜绿假单胞菌；
-％～％的瓶装矿泉水检出铜
绿假单胞菌。
• 刚出厂的产品中铜绿假单胞菌数量较少，但有文献报
道5加仑桶装产品（15～31天的保存期），铜绿假单胞
菌可生长繁殖达到 CFU/ml。
• 国内卫生标准：0 CFU/250ml
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三、实验室检验
GB/T 8538-2008铜绿假单胞菌检测（滤膜法）
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原 理
，
并将滤膜移至CN琼脂培养基上，于36℃士1℃恒
温箱中培养48h，能够在CN琼脂上生长并产生绿
脓菌素，或者能够在CN琼脂上生长并且氧化酶呈
阳性、紫外光（360±20nm）照射下能发荧光、
能够利用乙酰***产氨的革兰氏阴性无芽孢杆菌，
经证实为铜绿假单胞菌，则其检测结果为阳性。
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培养基和试剂
• 假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂（低温避光保存）
• 金氏B 培养基（低温避光保存）
• 乙酰***肉汤
• 营养琼脂
• 氧化酶试剂
• 钠氏试剂（配制好之后低温避光保存）
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设备和仪器
• 玻璃器具：所有玻璃器皿使用前需121℃高压蒸汽灭菌15分钟
• 恒温培养箱：36℃±1℃
• 紫外灯：波长应为360±20nm
• 滤膜：直径47mm， （处理方法：如滤膜未经灭菌，则使用前需先将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次15 min。前两次煮沸后需更换水，用蒸馏水洗涤2次～3次，以除去残留溶剂。建议使用一次性无菌滤膜。）
• 显微镜：10×～100×
• 冰箱：0℃～8℃
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