氨基酸的分离鉴定(纸层析法).doc

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氨基酸的分离（纸层析法）
一、 实验原理
1、 层析法又称色谱法，是一种物理的分离方法。利用混合物中各组分物理化学
性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等） ，使各组
分以不同程度分布在固定相和流动相两相中， 并使各组分以不同速度移动，从而 得到有效的分离。
操作方式：纸层析、薄层层析、柱层析等
分离机理：分配层析、吸附层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析等
2、 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，展层溶剂由有机溶剂和水 组成。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，在滤纸上水就被吸附在纤维素的纤维之间 形成固定相。当有机溶剂（流动相）沿纸流动经过层析点时，层析法上溶质就在 水相和有机相之间不断进行分配。由于溶质就在水相和有机相之间不断进行分配。 由于溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。
溶质在固定相中的浓度
分配系数
溶质在流动相中的浓度
物质被分离后在滤纸上的移动速率用 值表示：
原点到层析点中心的距离
原点到溶剂前沿的距离
只要条件（如温度、展层溶剂的组成）不变， 值是常数，故可根据 值作定性
依据。
氨基酸无色，利用茚三***反应，可将氨基酸层析点显色作定性、定量用。
二、 实验器材
标准氨基酸溶液、滤纸、层析缸、保鲜膜、剪刀、毛细管、电吹风。
三、 实验试剂
1、 酸相溶剂：V［正丁醇（） ］ : V［88%甲酸］:V［水］=15 : 3： 2
2、 显色贮备液：V（ ***-异丙醇）：V （甲酸）：V （水）=20： 1： 5
四、 实验操作
1、 点样
量取30mL层析溶剂、1mL显色贮备液于层析缸中，混匀密闭，静置。
戴好手套，在桌上铺好一层保鲜膜。取一张干净滤纸，将其剪彩为18cm*14cm 在纸的一端距边缘2cm处用铅笔轻轻划一条直线，在此直线上等距离分出几个点 作为点样原点。
用毛细管将标准氨基酸和未知样品分别点在点样点上， 每次点样后用电吹风
冷风吹干再点下一次，点样点直径不超过 5mm
2、 层析与显色
将滤纸卷成圆筒形，用钉书针固定成圆筒状，纸的两边不能接触。
将滤纸垂直放入盛有展层剂的层析缸中， 迅速盖紧层析缸盖（点样点的一端 朝下，展层剂液面需低于点样线1cm左右）。
待溶液前沿线距滤纸末端1~2cm（展层长度10cm约2h）后，取出滤纸（需 带上手套），用铅笔将前沿线作一标记。剪去缝合线，电吹风热风吹干（通风橱 中进行），即可看见层析斑点。
3、结果处理
用铅笔将层析图谱上的斑点圈出，分别测量点样点到层析点中心和点样点到 层析前沿的距离，计算各种标准氨基酸的 值，并根据样品分离的情况鉴定混合 样品中氨基酸的组分
五、结果与讨论
1、 层析图谱
2、 数据处理
Gly
Phe
Pro
His
样品Y09
中心到原 点距离/cm







前沿/cm





/cm