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分子生物学课件：分子生物学实验基.ppt

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文档列表 文档介绍

分子生物学实验基本原理
重组DNA的基本过程
DNA获得
酶切（粘末端）
连接
热激转化（大肠杆菌感受态制备）
阳性克隆筛选
载体
基因组DNA
重组载体
酶切割
酶切割
DNA连接酶
导入受体细胞
粘末端连接法
vector
restriction endonuclease
genomic DNA
ligase
vector
restriction endonuclease
genomic DNA
host
限制性内切酶
原核中，识别DNA特定序列（回文序列），切割DNA双链
粘末端和平末端
限制性内切酶作用机制
DNA连接酶
连接相邻DNA的5’P和3’OH
DNA连接酶并不能连接两条单链DNA分子或环化单链DNA分子，被连接的DNA链必须是双螺旋的一部分。
DNA连接酶作用机制
质粒
细菌中另一类遗传物质，染色体之外
双链闭合环状DNA，自我复制
含有抗生素抗性基因
碱裂解法提取质粒
利用质粒和染色体DNA变性和复性的差异

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