实验六微生物的简单染色及革兰氏染色.ppt

实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色
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细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的 制片和简单染色 革兰氏染色法
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细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的 制片和简单染色
一、实验目的
学****掌握微生物制片及简单染色的基本
技术
初步了解细菌、放线菌、酵母菌及
霉菌的形态特征和相互区别
巩固显微镜操作技术及无菌操作
技术
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二、基本原理
染色前必须固定细菌
其目的有二：
一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上
二是增加其对染料的亲和力
常用的有加热和化学固定两种方法
固定时尽量维持细胞原有的形
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常用碱性染料进行简单染色，原因在于微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与微生物细胞结合使其着色。常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。
当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带
正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红
等酸性染料染色
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三、实验器材与试剂
菌种：牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养的12-18小时枯草芽
胞杆菌和培养24h的金黄色葡萄球菌
溶液和试剂：草酸铵结晶紫染液、齐氏石炭酸复红染液、
吕氏碱性美蓝染液、革兰氏染色用碘液、
乳酸石炭酸棉蓝染液
仪器和其他用品：双层瓶、接种环、接种铲、接种针、
平皿、U型玻璃棒、解剖针、 解剖刀、
50%乙醇、20%甘油、高氏一号培养
基平板、马铃薯琼脂薄层平板等
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四、操作步骤
安全警示
，以免烫伤。不要将
载玻片在火焰上烧烤时间过长，以免载玻片破裂

，避免吸入孢子
，金黄色葡萄球菌为条件致病菌，
二甲苯为有毒物质。
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细菌制片及简单染色
涂片：将玻片分成两个区域，各滴上一小滴蒸馏水，再用无菌操
作的方法挑菌少许枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌于玻
片的水中，并充分混匀涂成薄膜
干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥
固定：涂面朝上，通过微火2-3次
染色：玻片泠却后加结晶紫滴于涂片上，覆盖涂面染色1分钟
水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至洗出水变无色为止
（注：勿冲去菌体）
干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干
镜检：显微镜下观察并记录
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四、实验步骤
1、菌落形态观察：
2、细菌简单染色：
3、细菌革兰氏染色。
注意：菌落颜色、湿度、形状、大小、透明度、颜色、边缘是否规则等特征。
染色过程：
涂片→干燥→固定→染色（1min）→水洗→干燥→镜检
注意事项：
涂片：取菌量不能太大
干燥：自然干燥
水洗：水流不能直接冲在涂菌处
滴加少量水
挑取菌体
涂片
干燥
固定
染色
水洗
干燥
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放线菌革兰染色
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