碱性磷酸酶动力学参数的测定要点.doc

1 题目:碱性磷酸酶动力学参数的测定(创新实践活动论文) 201 5年4月 24日· 北京 2 不同缓冲液对碱性磷酸酶动力学参数的影响摘要酶促反应动力学主要研究酶催化的反应速率以及影响反应速率的各种因素, 为了更好的发挥酶的高效性, 就必须准确把握酶促反应的条件。本文重点研究不同缓冲液所配制的酶液对酶促反应的影响。实验利用碱性磷酸酶溶解在 TRIS ,碳酸钠,去离子水等缓冲液中为酶液, 磷酸苯二钠为基质,进行实验,得到去离子水为最适缓冲液的结果,表明以去离子水为缓冲液所配制的酶液能使酶发挥最好的效果, 具有研究意义。关键词: 碱性磷酸酶; 缓冲液; 动力学参数; 本试验以碱性磷酸酶为催化剂, 磷酸苯二钠为底物, 在一定温度、 pH 及酶量的条件下, 碱性磷酸酶催化磷酸苯二钠转化为苯酚;利用分光光度计测定在不同底物浓度下苯酚的生成量。通过实验可以加深对有关酶促反应动力学基本知识的理解和记忆; 并熟记利用双倒数法测定酶 Km 值的原理, 熟悉试验方法。 1 实验材料、试剂与仪器 材料与试剂实验中使用的主要试剂有磷酸苯二钠:国药集团化学试剂有限公司分析纯醋酸镁:天津市永大化学试剂开发中心分析纯醋酸:北京化工厂分析纯碱性磷酸酶:北京化工厂分析纯 4-氨基安替比林:天津市永大化学试剂有限公司分析纯铁***化钾:北京化工厂分析纯硼酸:北京化工厂分析纯苯酚:天津市福晨化学试剂厂分析纯三羟***氨基甲烷( Tris ):北京化学试剂公司分析纯 NaOH :北京化工厂分析纯碳酸钠:天津光复科技发展有限公司分析纯碳酸氢钠:天津市福晨化学试剂厂分析纯实验中使用的主要溶液有(1) mol/L 碳酸盐缓冲溶液( pH=10 ):碳酸钠 g,碳酸氢钠 g,蒸馏 3 水溶解至 250 mL 。(2) mol/L 基质溶液:磷酸苯二钠 g (无结晶水),用煮沸冷却的蒸馏水溶解至 50 mL ,盛于棕色瓶,冰箱内保存。(3) mol/L 醋酸镁溶液:醋酸镁 g,蒸馏水溶解至 50 mL 。(4) 缓冲溶液: Tris g ,蒸馏水溶解至 100 mL ,取此溶液 10 mL , 加蒸馏水 80 mL ,再加 mol/L 醋酸镁 10 mL ,混匀后用 1%的醋酸调节 pH值至 , 用蒸馏水稀释至 100 mL 即可。(5) mol/L NaOH 溶液: NaOH 5g,蒸馏水溶解至 250 mL 。(6) 酶液:碱性磷酸酶 mg ,用 的Tris 缓冲溶液配制 50 mL ,冰箱内保存。碱性磷酸酶 mg,用 pH=10 的碳酸钠缓冲溶液配制 50 mL ,冰箱内保存。碱性磷酸酶 mg,用去离子水为缓冲溶液配制 50 mL ,冰箱内保存。(7)%4- 氨基安替比林液: 4-氨基安替比林液 g,碳酸氢钠 g,蒸馏水溶解至100 mL 。(8)% 铁***化钾溶液:铁***化钾 g,硼酸 g,,各溶于 100 mL 蒸馏水中, 溶解后混合至 250 mL ,盛于棕色瓶,冰箱内保存。(9)酚标准溶液:苯酚 g,溶于 mol/L 盐酸至 1000 mL ,为储备液。取此储备液2