3酶类药物及其生产工艺.ppt

常见的酶类药物及治疗作用常见酶类药物 1、L-天门冬酰***酶工艺路线 L-天门冬酰***酶工艺说明①菌种培养大肠杆菌 37℃培养 24h普通牛肉培养基;②种子培养 16 %玉米浆,接种量 1~ %, 37℃,通气搅拌培养 4~8 h; ③发酵罐培养玉米浆培养基,接种量 8%, 37℃通气搅拌培养 6~ 8h,离心分离发酵液,得菌体,加 2倍量***搅拌,压滤,滤饼过筛,自然风干成菌体干粉; ④提取、沉淀、热处理每千克菌体干粉加入 mol/LpH8 的硼酸缓冲液 10 L37 ℃搅拌 h, 30 ℃8 mol/L 醋酸调节 ~ ,压滤,滤液加入 2倍体积的***,放置 3~4h过滤,收集沉淀,自然风干,得干粗酶。取粗制酶,加入 0·3%甘氨酸,调节 搅拌 h离心,上清液 60 ℃ 30 min 热处理。上清液加 2倍体积的***,析出沉淀,离心,收集酶沉淀, mol/L , pH8 磷酸缓冲液溶解,离心得上清酶溶液。⑤精制、冻干调节 离心弃去沉淀, 清液再调 加入 50%聚乙二醇,浓度达到 16 %。 2~ 5℃放置 4~ 5天,离心得沉淀。蒸馏水溶解加 4倍量的***沉淀,同法反复 1次, , 磷酸缓冲液溶解, 50%聚乙二醇处理 1次,即得无热原的 L一天门冬酸***酶。溶于 mol/L 磷酸缓冲液,在无菌条件下用 6号垂熔漏斗过滤,分装,冷冻干燥制得注射用 L一天门冬酸***酶成品,每 I支 1万或 2万单位。二、细胞色素 C生产工艺临床上主要用于组织缺氧的急救和辅助治疗药物, 适用于治疗脑、心肌缺氧和其它因缺氧引起的一切症状。工艺过程①绞碎、提取、压滤取新鲜或冷冻猪心,去血块、脂肪和肌健等,绞肉机中绞碎。称取心肌碎肉,加 , 用硫酸调 pH 4左右,常温搅拌提取压滤,滤液用氨水调节 ,离心得提取液。心渣再加等量蒸馏水同上法重复提取 1次,合并两次提取液。②中和、吸附、洗脱提取液加氨水中和至 ,在冰箱中静止沉淀杂蛋白,吸取上层清液,每升提取液加入 10g人造沸石,搅拌吸附 40 min ,静置倾去上层清液。收集吸附细胞色素 C的人造沸石,用蒸馏水和***化钠溶液反复洗涤,然后装柱,用 25 %硫酸氨溶液洗脱,得洗脱液。③盐析、浓缩、透析洗脱液加入固体硫酸镀达到 45 %饱和度,使杂蛋白析出,过滤。收集透明滤液,缓缓加入 20 %三***醋酸,边加边搅拌使细胞色素C沉淀析出,离心收集沉淀。再将沉淀溶于蒸馏水,装入透析袋中,透析至无硫酸根为止,过滤得细胞色素 C 粗品溶液。