实验6酶的特异性.ppt

实验六酶的特异性生物化学实验之-- 山东师范大学生命科学学院【实验目的】学****酵母蔗糖酶(粗提液)和唾液淀粉酶的制备,了解酶的特异性及检测方法。【实验原理】酶是生物催化剂,酶对所作用的底物有严格的选择性,即酶的特异性。淀粉和蔗糖都是非还原性糖,分别为唾液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物。淀粉被唾液淀粉酶水解生成具有还原性的麦芽糖,蔗糖被蔗糖酶水解生成具有还原性的葡萄糖和果糖。 Benedict 试剂(含有 Cu 2+)常用于检验还原糖的存在,其被还原后生成砖红色的 Cu 2O沉淀。【器材及试剂】(一)器材: 1. 恒温水浴锅 2. 试管及试管架 3. 离心机 4. 吸量管 、量筒、漏斗等(二)试剂: 1. 2% 蔗糖 2. 1% 淀粉(内含 % 的 NaCl ) 3. 唾液淀粉酶溶液 4. 蔗糖酶溶液 5. Benedict 试剂【实验步骤】(一)淀粉酶的特异性 : 先用蒸馏水漱口,然后用洁净试管 1支, 取唾液(无泡沫)约 2ml ,蒸馏水 20 倍稀释, 备用。 5支,标号,按下表所列的次序操作: —— 蒸馏水( ml ) ——唾液淀粉酶( ml ) — — — 2% 蔗糖溶液( ml ) —— — 1% 淀粉溶液( ml ) 54321 试管编号试剂 ,置 37 ℃恒温水浴保温 10min ,然后每管加入 Benedict 试剂 2ml ,再放沸水浴 5min 。观察各管颜色变化,并解释实验结果。(二) 蔗糖酶的特异性 1. 蔗糖酶溶液的制备: 取活性干酵母 ,置于研钵中, 加少量蒸馏水及石英砂研磨提取约 10min ,再加蒸馏水至总体积约为 20ml ,过滤或离心,滤液或上清液备用。 2. 取试管 5支,标号,按下表所列的次序操作: —— 蒸馏水( ml ) ——蔗糖酶( ml ) — — — 2% 蔗糖溶液( ml ) —— — 1% 淀粉溶液( ml ) 54321 试管编号试剂 3. 摇匀, 置 37 ℃恒温水浴保温 10min ,然后每管加入 Benedict 试剂 2ml ,再放沸水浴 5min 。观察各管颜色变化, 并解释实验结果。【注意事项】唾液的稀释倍数因人而异,有时差别很大, 稀释倍数可以是 50 ~ 300 倍。【思考题】 1 、若将淀粉酶和蔗糖酶煮沸 1min ,实验结果会发生什么样的变化? 2、酶作用的专一性有哪几种?