植物细胞骨架光学显微镜观察.doc

植物细胞骨架光学显微镜观察.doc植物细胞骨架的光学显微镜观察黄斌谢卓文徐安乐钟建良邹天生( 中山大学生命科学学院 00 级生物科学专业,广州 510275) 【摘要】本实验根据细胞骨架的特性,利用适当浓度的 TritonX-100 处理洋葱鳞茎内表皮细胞, 破坏细胞内大多数蛋白质而保存细胞骨架系统, 再经考马斯蓝染色, 在光学显微镜下观察细胞骨架,对细胞骨架的分布,膜骨架,核骨架,胞间连丝等进行了初步的研究。【关键词】细胞骨架, 光学显微镜, 纤维, 网络结构 1 引言细胞骨架是真核生物细胞中的重要结构, 起细胞支架的作用, 并参与胞内物质运输、细胞运动、分泌吸收、细胞通讯、有丝分裂等。由于与细胞各项功能的密切关系, 细胞骨架的研究已成为当今细胞生物学中较具吸引力的领域之一。对细胞骨架的研究须先对其进行观察。本实验以洋葱鳞茎内表皮细胞为材料对细胞骨架进行观察研究, 基本原理是细胞内脂质和大部分蛋白质可与去垢剂 Triton-100 形成去垢剂- 蛋白/ 脂质复合物, 从而溶于水中被提取, 而结合成纤维状的细胞骨架蛋白则保持其在生活细胞中存在的状态。之后用考马斯亮蓝对蛋白质染色,使骨架系统在光学显微镜下可见,从而对其进行观察研究。 2 材料与方法 材料新鲜洋葱鳞茎,撕取内表皮,切成约 × 大小。 器材光学显微镜、精确天平、 移液枪、 50ml 烧杯、玻璃滴管、容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子。 试剂: ? M- 缓冲液: 50mmol/L 咪唑、 50mmol/LKCl 、 、 、 1mmol/LEGTA[ 乙二醇双( α- 氨基乙基)醚四乙酸]、 1mmol/L 巯基乙醇。? 6mmol/ 磷酸缓冲液: Na2HPO4 · 12H2O 、 KH2PO4 加入 100ml 蒸馏水。?1% TritonX-100 : 100 % TritonX-100 加入 A液 。? %考马斯亮蓝 R250 : 考马斯亮蓝 R250 粉加入甲醇 、冰醋酸 7ml 、蒸馏水 。?3 %戊二醛: 6ml 25 %戊二醛加入 B液 44ml 。 方法将材料置于装有 PH6. 8 磷酸缓冲液的烧杯中, 使其下沉。吸去磷酸缓冲液,用1% TritonX-10 0 处理 30 分钟。吸去 TritonX-100 ,用 M- 缓冲液洗三次, 每次 10 分钟。 %考马斯亮蓝 R25 0 染色 30 分钟。用蒸馏水洗 1-2 次, 展平置于载玻片上, 加盖玻片, 于普通光学显微镜下观察。选取骨架形态清晰、典型的细胞或细胞群,在适当放大倍数下摄像。 3 结果与分析 细胞骨架观察结果光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓清晰可见( 如图 1), 细胞壁及其分界明显。 10 × 10 倍镜下可粗略观察到细胞内粗细不等的蓝色纤维、团块形成的网状结构。同一细胞内各处骨架的密集度不均匀, 细胞核区域的纤维相对密集, 蓝色浓重, 甚至分辨不出网络结构, 另外可见细胞壁区域有零星蓝色纤维分布; 相邻细胞的密集程度基本一致, 但有少数细胞有较大不同。 10 × 40 倍镜下可清楚