小鼠骨髓多染红细胞微核试验氟化钠课件.ppt

小鼠骨髓多染红细胞微核试验***化钠
微核试验
常见 致突变试验, 细胞遗传损伤 指标之一, 可用于染色体断裂剂和纺锤体损伤剂 检测
化学致突变物
无着丝点断片
整个染色体
带着丝粒 环和断片
原理:
1 有丝分裂毒物 作用使部分染色体或带着丝点 染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中
断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动, 从而遗留在细胞质中
小鼠骨髓多染红细胞微核试验中
微核可出现于多个细胞中, 但在有核细胞中难以与正常核 分叶及核突出物区分, 故常计数PCE细胞中 微核, 因为成红细胞发展为红细胞时, 主核排出, 成为PCE, 这些细胞保持其嗜碱性约二十四小时, 然后成为NCE,并进入外周血。
在主核排出时, 已形成 微核可留在胞浆中。所以, 这些在细胞中没有主核, 便于观察。观察并计数多染红细胞中 微核, 可反应染色体断裂和纺锤体损伤情况。本试验 测试终点为染色体损伤。
PCE: polychromatic erythrocyte,多染红细胞 NCE: normochromatic erythrocyte,正染红细胞
试剂与器材
（一）试验动物: 成年小鼠
（二）试剂:
受试物: ***化钠
阳性对照物: 环磷酰***、丝裂霉素C、三亚乙基密***、甲磺酸乙酯、乙基亚硝基脲…
小牛血清（）
甲醇
磷酸缓冲液
Giemsa（吉姆萨）染液: 用时, 磷酸缓冲液1:10稀释
（三）器材: （略）
试验设计
试验动物: ICR小鼠, 体重18-22克, 每组10只, 雌雄各半, 随机分组
剂量分组:
标准:
最高剂量可选择动物 最大耐受剂量或化合物LD50 50%
不能引发显著 骨髓抑制, 即PCE/(PCE+NCE)不低于对照值 20%
（因为骨髓发生抑制时, 外周血会发生反流）
***化钠: LD50=
阴性对照组
水
受试物剂量组
高剂量组
*50%=
中剂量组
*1/2= 或*1/4=28mg/kg
低剂量组
*1/2= 或*1/4=7mg/kg
阳性对照组
环磷酰***
120mg/kg
1/2
1/4
1/8




NaF:90mg
8ml

4ml
4+4ml

4ml
4+4ml

三. 染毒路径: 灌胃
四. 染毒次数及骨髓采样时间
一次染毒、间隔二十四小时两次染毒、数次染毒
应于最大敏感期取样（预试验）
此次实****采取一次染毒, 二十四小时后取样测定
操作步骤
二十四小时后
制片
染色
镜检
染毒
取材
取骨
擦净血污、剔去肌肉
剪去骨骺端
小牛血清
混匀、推片
吹干
甲醇中固定2min
Giemsa染色液染色10-15min
pH=
pH=
冲洗、晾干
镜检、细胞计数