Lowry法检测蛋白质的含量.doc

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Lowry法检测蛋白质的含量
一、实验原理：首先在碱性条件下蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜复合物，该复合物加入酚试剂后产生蓝色复合物。该蓝色复合物在650nm处的吸光度值与蛋白质的含量成正比，根据供试品的吸光度，计算供试品的蛋白质含量。
二、配液
碱性酒石酸盐溶液：，，，加水至1L，溶解混匀。
硫酸铜溶液：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O），加水至200ml，溶解混匀。
碱性铜溶液（现用现配）:量取溶液A 100ml，溶液B 2ml，混匀即得。
标准蛋白质储备液（1mg/ml)：用纯化水将牛血清白蛋白对照品定量稀释至1mg/ml，混合均匀，，1ml/管，贴好标签，于-20℃或以下低温冰箱贮存。
标准蛋白质工作液（100μg/ml）:将标准蛋白质贮备液用前10倍稀释至100μg/ml。
阳性对照（约50μg/ml的牛血清白蛋白溶液） ：精密称取牛血清白蛋白25mg，加纯化水溶解，加入500ml容量瓶中，定容至刻度，混合均匀，冷冻管分装，，贴好标签，于-20℃或以下低温冰箱贮存，有效期两年。
三、步骤：
（1mg/ml）稀释成100μg/ml的标准工作液。（双份）、、、、，分别加入刻度试管中，补水至1ml。
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（双份）于刻度试管中；。
（溶液A100ml、溶液B2ml混匀），涡旋混匀，室温条件放置10分钟。
（稀释至1N），摇匀，室温放置30分钟。
，测定标准溶液的吸光度值，以及供试品和阳性对照的吸光度值。根据标准蛋白浓度和其对应吸光度的标准曲线，计算供试品和阳性对照的蛋白含量。