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黑曲霉的分离筛选
一、实验简介
黑曲霉广泛分布于世界各地的粮食、 植物性产品和土壤中。 黑曲霉的最适温 度为37 C,黑曲霉对营养要求较低，只要培养基中含有碳源、氮源及磷、钾、镁、 硫等元素即能生长良好，实验中采用察氏培养基进行培养。
黑曲霉的菌落蔓延迅速, 但生长稍局限, 菌丝初为白色, 后变成鲜黄色直至 黑色厚绒状, 背面无色或中央略带黄褐色。 顶部形成球形顶囊, 其上全面覆盖一 层梗基和一层小梗, 小梗双层褐色, 梗基较短, 上长有成串褐黑色的球状分生孢 子。〜。分生抱子头球状，直径700〜800卩m,褐黑色。
黑曲霉的个体形态和菌落形态都比较特殊, 容易分辨,可利用平板划线法或 稀释涂布法，得到单菌落，并结合显微镜检测，多步鉴定、纯化，得到的纯的菌 种。
二、实验试剂与材料
1、材料： 黑曲霉抱子悬浮液
2 、溶液和试剂： ***钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、***化钾、硫酸亚铁、蔗糖、 琼脂、 1mol/L 氢氧化钠溶液、 1mol/L ***化氢溶液、 75% 乙醇、乙醇***混合 液、溴甲酚绿、水。
3、器材和其他用品： 三角瓶、试管、搪瓷杯、培养皿、接种环、酒精灯、高 压蒸汽灭菌锅、试管架、载玻片、盖玻片、光学显微镜、恒温培养箱、纱布、牛 皮纸、滤纸、 pH 试纸、擦镜纸。
、实验步骤和过程
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1、无菌器材及无菌水的准备
培养皿： 洗净的培养皿烘干后， 每组将 5 套培养皿叠在一起， 用报纸卷成一 筒，然后进行灭菌。注意，一定要卷紧。
试管：做合适的棉塞，每组捆扎 5 支试管，用报纸包在一起后， 用线绳扎紧， 扎成活结，另一头再用皮筋扎好，然后进行灭菌。
三角瓶：在三角瓶瓶口塞一八层纱布，盖上牛皮纸，用线绳扎成活结，然后 进行灭菌。注意，装入的培养基不超过三角瓶的 1/2 。
上述物品均要用记号笔注明班级、组别、日期。
高压蒸汽灭菌
2 、查氏培养基的配制
称量—熔化—定容—调pH —分装—加塞—包扎标记—灭菌—搁置斜面与倒平板 f无菌检查
培养基配方：***钠3g 磷酸氢二钾1g 硫酸镁(MgS04 H20 ) ***
化钾
硫酸亚铁 蔗糖 30g 琼脂 20g 蒸馏水 1000ml -
称量：按照培养基配方，依次准确地称取药品，放入搪瓷杯中。
熔化：量取自来水，加入所需水量的一部分至上述搪瓷杯中， 用玻璃棒搅拌， 待药品溶解后，加入琼脂，倒入余下的水，在电热板上加热熔化。
定容：将加热后的培养基导入量筒中，用自来水进行定容，至 1000ml 。
调 pH ：待培养基稍冷却后，用精密 pH 试纸测量培养基的原始 pH ，若偏
酸，用 1mol/L Na0H 边滴加边搅拌，使之达到 - 。若偏碱，则用 1mol/L
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HCl 调节
分装：用分装装置将培养基装入试管，高度为试管总长的 1/5 ，共 20 支。 余下培养基转入三角瓶中，培养基的量为三角瓶容量的 1/3-1/2 。
加塞、包扎、标记：试管加棉花塞， 5 支一捆包扎好，棉塞外加一层报纸防 灭菌时冷凝水湿润棉塞，在外用线绳扎成活结，；三角瓶用纱布塞住瓶口，并用