日本沼虾细胞自噬基因ATTG13和ATG101的克隆及其低氧胁迫下表达分析.pdf

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◇，。，。篓夸旅日本沼虾细胞自噬基因虯形目寺及其低氧胁迫下表达分析陈寅翔郑诚赵倩倩薛孙盛明程躾彳和彳形诩卓嵌接，首次克隆了日本沼虾的细胞自噬基因形娜ǔ蛄校毡菊虾的细胞自噬基因彳彤分析，氨基酸相似度比对显示，日本沼虾的细胞自噬基因彳弼富含高度保守的作用结构域幌低辰鞣治鱿允荆毡菊酉旱南赴允苫粥与凡纳滨对虾彳粥具有最近的亲缘关系；通过实时荧光定量际狿笛榉治龇⑾郑日本沼虾彳粥和彳粥谄涓我认俸湍宰橹泶锪拷细撸诩∪庵斜泶锪拷系停保湎赴允苫蜥苄歪苠表达量显著螅笛樽橛攵哉兆榈弼和表达量差异不显著；关键词：日本沼虾；彳弼幌赴允桑坏脱跣财摘要：为研究自噬相关基因—应答低氧胁迫过程中的调节作用，实验采用的开放阅读框，开放阅读框编码霭被帷Ｍü砑蜕镄畔⑼径云湫蛄薪利用狿追踪其在肝胰腺组织低氧胁迫过程中出现的表达差异情况，结果显示，实验组日本沼虾在低氧胁迫高于对照组，而在复氧分析结果显示，日本沼虾虯泶锓岫然居牖虮泶锬Ｊ相似。透射电镜分析结果显示，在低氧胁迫螅我认僮橹械娜苊柑蹇J汲现自噬空泡，表明急性低氧胁迫会诱导自噬体的形成，本研究结果可为了解日本沼虾应对低氧胁迫下的调控机制提供理论参考。际跬ü寺〔庑蚝突蛐蛄衅全长锹己盼狹，包括的┒朔欠肭，，的痷和的开放阅读框7旁亩量虮嗦个氨基酸；彳锹己盼狹，包括的┒朔欠肭的和中图分类号：文献标志码：自噬，或称自体吞噬魑O赴内的降解系统，不仅可以将受损的细胞器、错误折叠的蛋白及其他大分子物质等运送到溶酶体中降解”也亲魑R恢侄厥障低常降解产生的能量和产物用于细胞的修复生长和生物体内的平衡调节。通过这个过程生物可以适应不断变化的外界环境，控制细胞的发育分化。细胞自噬在真核生物中，从酵母到哺乳动．上海海洋大学，农业农村部淡水水产种质资源重点实验室，上海；虾：Ｑ蟠笱В种首试捶⒕蛴肜媒逃恐氐闶笛槭遥虾收稿日期：．．通信作者：孙盛明掌，甿簊甤；修回日期：．．资助项目：国家重点研发计划；国家自然科学基金；广东省重点研发计划藀海痺中国水产学会主办甤
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日本沼虾虯卫的全长克隆本实验通过对日本沼虾自噬相关基因彳弼和的克隆与序列特征分析，探讨日本沼虾低氧胁迫下自噬基因彳粥和彳粥泶锬薏畈怀齩．曲用于随后的么粥和组织表达分析。通过结合套式聚合酶链反应扩增出么粥和么弼’端和恕＞酆厦噶捶从μ逑滴、小鼠竚淞靶‘牧嫌敕椒验组．縪．伽。每组实验平行巍Ｊ褂孙盛明，等：日本沼虾细胞自噬基因粥目寺〖捌涞脱跣财认卤泶锓治受到多种信号通路的调控，已报道有多种自噬特异性基因及多个相关基因参与了自噬体形成的各个阶段辏等‘发表了基于酵母自噬基因的统一命名法，使用代表白噬特异性基因和相应的蛋白质。由这些自噬基因编码的鞍自谧允傻钠鹗肌⒀由臁成熟和降解中起重要作用胪也是っ感藕磐返囊桓霭械悖猛位于细胞质中，其基因在哺乳动物中高度保守，在大多数真核生物中也表现出保守性，被认为以保护槐坏鞍酌附到猓佣榷ㄏ、黄颡鱼呐譊冢府幻力‘凸蓿琽砌‘是细胞自噬基因的克隆与表达分析在甲壳动物虾頲阳錰“隰鵇已俏夜诚类的重要本土品种之一口，近年来，相关课题组面的研究均取得了一定进展’欢毡菊酉问题提供理论参考。实验材料％，每天早晚定时投喂配合饲料。实验组和对每个水槽放尾体质量约。分别给予不同浓溶氧检测仪检测水体值，通过氮气替换空气的方法调节水中的水平，使其维持在设定范围内，具体方法参照蓉】。低氧胁迫实验均选择健康活泼的个体，取肝胰腺、鳃、脑、肠道和肌肉等肿橹进行总鼢峪提光光度计测定呐ǘ群痛慷龋ü碇组织总鼢限进行反转录，并保存在一软件分别设计疪’的特异性引物Ｒ匀毡菊酉旱母我认僮橹痗D０澹止，反应条件：。窝罚猲。用生物信息学分析平台及用途物在进化上是保守的，并且在各种细胞功能中具有重要作用唧。一系列研究发现，自噬的过程唤鍪峭淌商逍纬伤璧淖允梢蜃樱通过蚒牧姿峄约癆．。复合物的调节来调节自滕【】。定与复合体中的苯酉嗷プ饔茫胞中乃剑鹘谧允商逍纬蛇萞。目前，部分脊椎动物和节肢动物中关于腁序列克隆和分析工作相继完成，如人位鵇瑉‘。⑴！轉汀皉‘∥螂．忽～泐Ⅵ、黄粉虫溃一中较少报道。作为淡水经济虾类之一，日本沼在日本沼虾人工养殖技术和群体遗传多样性方对水环境溶解氧含量要求较高，日本沼虾养殖池塘发生低氧胁迫时，池塘内日本沼虾会通过趋向浅水区及水草上接触空气来增加自身摄氧量并降低摄食频率，当严重缺氧时会出现大规模浮头现象，甚至造成大面积死亡，导致渔民严重的经济损失，因此亟需了解日本沼虾低氧应激分子机制。迄今，关于日本沼虾细胞自噬在低氧胁迫下的响应机制的研究尚不多见刚。式，并检测了低氧胁迫下日本沼虾肝胰腺组织自噬体的形成，为解决高密度聚集饲养或水体富营养化而导致日本沼虾池塘中低氧胁迫口的实验虾为野生日本沼虾，采自太湖地区，野生日本沼虾暂养在实验室埽褂贸茸岳水并溲跹常栈凰吭嘉W芩康ァ照组各设銎叫兴的健康日