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PCR技术
摘要：PCR技术是80年代中期发展起来，具备20近年发展史一种体外酶促合成、扩增特定DN***段办法。它从1993年到当前经历了四代产品，在此期间衍生出了诸各种类PCR技术，因这些PCR技术具备高强度特异性和敏捷度以及检测速度快，精确性好等长处，在农业、食品科学、医学等各个领域有了重要应用；但PCR技术办法还不够完善，有诸多问题有待解决。该文从PCR技术概述、基本原理、分类以及应用进行综述，并对PCR技术所存在问题阐述了其发展前景及趋势。
核心词：PCR技术；扩增；Taq DNA 聚合酶；定量；引物；DNA；应用；标记；问题
一、PCR概述
1、什么是PCR
聚合酶链式反映（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。
2、PCR技术发展史
PCR技术是80年代中期发展起来体外核酸扩增技术。 它具备特异、敏感、产率高、迅速、简便、重复性好、易自动化等突出长处。
　　PCR技术最早由美国Cetus公司人类遗传研究室Kary Mullis及同事于1985年发现并研制成功；最早应用报道是Saiki等1985年将PCR技术应用于β-珠蛋白基因扩增和镰刀状红细胞贫血产前诊断。随后使用了1976年Chien等分离热稳定性Taq DNA聚合酶，使PCR操作大为简化，并使PCR自动化成为也许；1987年Kary Mullis等完毕了自动化操作装置，使PCR技术进行实用阶段。
　　复旦大学1988年起开始研制耐热性多聚酶，军事医学科学院马立人专家等在1989年研制成功了PCR自动装置，并且不断推陈出新，近来研制PTC-51A/B型DNA热循环仪体积小，造型美观，价格适当，操作简朴，尤为适当国内应用。
　　PCR创造不到，却已获得广泛应用。每年均有上千篇文章　刊登。1991年，期刊“PCR办法与应用
”（PCr Methods and Application）在美国创刊，使关于学者有了自己论坛和参照专业期刊。PCR技术作为一种办法学革命，必将大大推动分子生物学各关于学科研究，使其达到一种新高度。
1993年度诺贝尔化学将已于10月13日揭晓，Kary Mullis因创造了“聚合酶链式反映”而获得此殊荣。当前世界各地都在使用PCR检测病人血液中微量遗传物质，这一成就为精准诊断艾滋病及其他病症铺平了道路。瑞典皇家科学院说：“PCR办法已经广泛应用于生物医学中。该办法同DNA测序法结合起来很也许将成为研究动植物分类学一种革新工具。”一名加拿大籍英国科学家Michael Smith因开创了“寡核苷酸基因定点诱变”办法而与Mullis同享此荣。
聚合酶链式反映从1993年到当前共经历了四代产品：
第一代：手动/机械手式水浴基因扩增
用三个恒温水浴箱，分别将三个水浴温度恒定在三个温度：PCR高温变性温度（如94℃）低温复性温度（如58℃），适温延伸温度（如72℃）。再用一种装有PCR标本试管提篮，用手工在不同温度水浴箱中依次水浴，标本在每个水浴箱中恒温时间用秒表计时。这样PCR标本就能完毕下述形式热循环：
94℃ 30S 58℃ 45S 72℃ 60S
40次循环
这种办法特点是：实验人员劳动强度大，容易因疲劳引起差