生物化学实验-氨基酸分析报告实验报告材料.doc

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实验名称
(Title of Experimetn)
氨基酸薄层层析
实验日期
(Date of Experiment)
实验地点(Lab No.)
合作者(Partner)
指导教师(Instructor)
总分
(Total Score)
XX
教师签名(Signature)
某某
批改日期
(Date)
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【实验报告第一局部〔预****报告容〕：①实验原理、②实验材料〔包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材〕、③实验步骤〔包括实验流程、操作步骤和须知事项〕；评分〔总分为30分〕：XX】
一、预****报告
实验原理：
层析〔chromatography〕：利用混合物各组分物理化学性质的差异，将多组分混合物进展别离与测定的方法。
固定相〔stationary phase〕
层析体质的一个基质。能与待别离的化合物进展可逆的吸附、溶解、交换等作用。
流动相〔mobile phase〕
在层析过程中推动固定相上贷别离的物质朝着一个方向运动的液体或气体。
迁移率〔rate of flow，Rf〕
一定条件下，在特定时间某一组份在固定相移动的距离与流动相本身移动的距离之比值，Rf值≤1。
层析原理：层析体系由一个固定相和一个流动相组成。流动相对固定相做相对运动，从而推动待别离的混合物样品通过固定相向前移动。样品中各组份物理化学性质不同，与两相发生相互作用的能力不同，被流动相推动前进时受到的阻力和移动速度不同，一定时间后，不同组份就可以在固定相上别离。
根据固定相基质的形式，层析可分为纸层析、薄层层析和柱层析。薄层层析是在玻璃或塑料等光滑外表铺一层很薄的基质进展层析。
薄层层析〔thin layer chromatography，TLC〕：是将吸附剂均匀地在玻璃板上铺成薄层〔
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固定相〕，再把样品点在薄层板一端，再把板的这端浸入适当的溶剂〔流动相〕在薄层板上扩展。并在此过程过吸附——解吸附——再吸附——再解吸附的反复进展，而将样品各组份别离出来。
本次实验：
具体原理：当流动相在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。
吸附剂〔固定相〕：硅胶〔.〕。为使制成的薄层板不易松散，参加5%羟***纤维素钠〔CMa〕作黏合剂。
展开剂：正丁醇、冰醋酸和蒸馏水的混合液〔80:10:10,V/V/V〕。
展层-显色剂：按照10:1比例〔V/V〕%茚三***溶液。
活化〔activation〕：在一定温度下，对吸附剂硅胶加热去除水分。可使硅胶的活性提高，吸附能力加强。
氨基酸与茚三***的显色反响：茚三***水化后生成的水合茚三***在加热时被复原，此产物与氨基酸加热分解产生的氨结合，以与另一分子水合茚三***缩合生成紫红色化合物而使氨基酸斑点显色。
Rf值：
由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率〔Rf值〕也是恒定的，因此可以根据Rf值来鉴定被别离的物质。
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实验材料：
样品：
1、;
2、 ;
3、;
4、混合氨基酸溶液。
试剂：
硅胶〔.〕
%羟***纤维素钠〔CMa〕
层展-显色剂：按照10:1比例〔V/V〕混匀的展开剂〔正丁醇、冰醋酸和蒸馏水的混合液〔80:10:10,V/V/V〕〕%茚三***溶液。
仪器与器材：
层析版〔6cm×15cm〕
小烧杯
量筒〔10ml〕
刻度尺
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铅笔
毛细玻璃管
层析缸
烘箱
天平
药匙
实验步骤：
实验流程：
操作步骤：
步骤
操作
〔1〕制板
①调浆：称取硅胶3g，%羟***纤维素钠8ml，调成均匀的糊状
②涂布：取洁净的枯燥玻璃板涂层并涂抹震荡均匀
③枯燥：将玻璃板水平放置，，自然晾干至外表没有明显水渍
④活化：70°C烘干60min
〔2〕点样
①标记：用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点并做好标记。每个样品间相距1cm
②点样：、精氨酸、甘氨酸、混合氨基酸溶液，
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轻轻接触薄层外表点样。加样原点扩散直