细胞计数方法------细胞计数板法.doc

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细胞计数方法------细胞计数板法
实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。
具体操作：
1. 。其中由于操作人员采血不顺利，器材处理、使用不当，稀释不准确，细胞识别错误等因素所造成的误差属技术误差；而由于仪器〔计数板、盖片、吸管等〕不够准确与精细带来的误差称仪器误差，由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差属于分布误差或计数域误差〔filed error〕。仪器误差和分布误差统称为固有误差或系统误差。技术误差和仪器误差可通过规X操作、提高熟练程度和校正仪器而防止或纠正，但细胞分布误差却难于彻底消除。因此，搞好红细胞计数的质量控制一般需采用以下措施。
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1．防止技术误差，纠正仪器误差
〔1〕所用器材均应清洁枯燥，计数板、血盖片、微量吸管与刻度吸管的规格应符合要求或经过校正。①计数板的鉴定：要求计数室的台面光滑、透明，划线清晰，计数室划线面积准确。必要时采用严格校正的目镜测微计测量计数室的边长与底面积，用微米千分尺测量计数室的深度。美国国家标准局〔NBS〕规定每个大方格边长的误差应小于1%，即1±±。假如超过上述标准，应弃之不用。②血盖片应具有一定的重量，平整、光滑、无裂痕，厚薄均匀一致，可使用卡尺多点测量〔至少在9个点〕，。必要时采用平面平行仪进展测量与评价，要求呈现密集平行的直线干预条纹。最简单的评价方法是将洁净的盖片紧贴于枯燥的平面玻璃上，假如能吸附一定的时间不脱落，落下时呈弧线形旋转，表示盖片平整、厚薄均匀。同时，合格的盖片放置在计数室外表后，与支持柱严密接触的部位可见到彩虹。精选出的盖片与其他盖片严密重合后，在掠射光线下观察，如见到完整平行的彩虹条纹表示另一枚盖片质量也符合要求。③目前临床实验室多采用一次性微量采血管采集毛细血管血，除注意定点购置使用信誉较好厂家的产品外，还应对每一批量的采血管进展抽样检查，可通过水银称重法或有色溶液比色法进展校正，误差不应超过±1%。
〔2〕红细胞稀释液应等渗、新鲜、无杂质微粒。
〔3〕严格操作，从消毒、采血、稀释、充池到计数都应规X，尤其应注意的是血样稀释与充池时既要作到充分混匀，又要防止剧烈震荡为破坏红细胞。必须一次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与血盖片之间的矩形边缘为宜。
〔4〕报告法定计量单位。
2．缩小计数域误差或分布误差 由于血细胞在充入计数室后呈随机分布或称Poisson分布〔 〕，而我们所能计数的细胞分布X围是有限的，由此造成的计数误差称为计数域误差或分布误差。缩小这种误差的有效方法就是尽量扩大细胞计数X围和计数数目，一般先进展误差估计，然后决定所需计数的数目和计数X围，只要能将误差控制在允许X围内即可。Berkson指出，当使用同一支吸管、同一面计数室，，有望将 CV控制在可承受的7%以内。对于红细胞计数而言，由于红细胞数量较多，在计数室中显得比拟“拥挤〞，根据Poisson公式推断， 。欲将误差控制在变异百分数5%以内，至少需要在计数室中计数400个红细胞，因此要求计数五个中方格的红