一般微生物限度方法学验证.doc

微生物限度检查方法学验证 1、供试品: XXXXX 胶囊(批号: XXXXXX ) 2、菌种: 菌落计数用菌种: (1) 枯草芽孢杆菌[ (B)63501] (2) 金黄色葡萄球菌[ (B)26003] (3) 大肠埃希菌[ (B)44102] (4) 白色念珠菌[ (F) 98001] 控制菌检查用菌种: (1) 大肠埃希菌[ (B)44102] (2) 金黄色葡萄球菌[ (B)26003] 3、培养基:营养肉汤培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、 4-***伞形***葡糖苷培养基( MUG )。 4、预试验按照中国药典 2005 年版微生物限度检查法中常规法及培养基稀释法检验,金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的回收率均小于 70% ,本品有抑菌作用。 5、细菌、霉菌及酵母菌计数按照中国药典 2005 年版微生物限度检查法进行细菌、霉菌及酵母菌计数的方法学验证试验及菌落计数。 菌液制备: (1) 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至 10 ml营养肉汤中,35 ~37℃培养 18 ~24小时,取此培养液 1ml %无菌***化钠溶液 9ml ,采用 10倍递增稀释法,稀释至 10 -5~10 -7,使菌数约为 50 ~ 100cf u/ml 。(2) 接种白色念珠菌的新鲜培养物至 10ml 改良马丁培养基中,23 ~28℃培养24 ~48小时,取此培养液 1ml %无菌***化钠溶液 9ml ,采用 10倍递增稀释法,稀释至 10 -5~10 -7,使菌数约为 50 ~ 100cfu/ml 。 供试液的制备取供试品 10g ,p 无菌***化钠- 蛋白胨缓冲液至 100 ml ,振摇,使呈 1:10 的供试品储备液。取 1:10 的供试品储备液 10ml ,5 00转/分离心 5分钟,取出上清液, 无菌***化钠-蛋白胨缓冲液至 10ml , 即为供试液。 验证方法: (1) 菌液组分别取菌液 1ml ,采用平皿计数法,测定上述制备好的菌液中每毫升的活菌数,测定结果见表 1。(2) 供试品对照组取供试液 1ml ,采用薄膜过滤法,测定供试品本底的菌数,冲洗液为 pH 无菌***化钠- 蛋白胨缓冲液,每次 100ml ,冲洗三次, 测定结果见表 2。(3) 试验组取供试液 1ml ,按供试品对照组同法操作,在第三次冲洗液中加入 50 ~ 100cfu 试验菌,置规定温度培养 2 ~5天观察结果,测定结果见表 3。(4) 稀释剂对照组分别取 500 ~ 1000cfu 试验菌,按供试液的制备同法操作后,制备稀释剂对照液,测定菌数,测定结果见表 4。 测定结果表 1、菌液组菌落计数( cfu ) 金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌大肠埃希菌 12 平均表2、供试品对照组菌落计数( cfu ) 试验次数细菌数霉菌、酵母菌数 12 平均 12 平均 123 表3、试验组菌落计数( cfu ) 金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌大肠埃希菌 123表 4、稀释剂对照组菌落计数( cfu ) 金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌大肠埃希菌 123表 5、试验组回收率测定结果回收率% 金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌大肠埃希菌 123表 6、稀