分子诊断学重点内容.doc

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分子诊断学重点容〔Navy
1、分子诊断学〔molecular diagnostics是利用分子生物学技术来研究机体外源性和源性生物大分子和大分子体系的存在、结构或表达调控的改变,从而为疾病的预测、预防、诊治和转归提m repeat , STR>
STR在人类基因组平均15-20kb就有一个STR 点位,占基因组的10%,多存在于非编码区及含子中。主要用途： ①人类基因遗传图谱的制作。②目的基因筛选和基因诊断。③法医学个体识别和亲权鉴定。
33、病毒〔virus是一类比较原始的、有生命特征的、能够自我复制的、严格细胞寄生的非细胞生物,是结构最简单、最微小的生命形式。
34、末端正向重复序列 又称末端冗余〔terminal redundancy是指双链DNA分子两端有一段相同的核苷酸序列
35、末端反向重复序列〔inverted terminal repeat,ITR指病毒基因组两端的反向互补重复序列。ITR可能与病毒的复制、转录及整合有关
36、重叠基因：许多病毒基因组的一段DNA序列有两个或两个以上的开放读码框架,可以编码两种或两种以上的多肽链,称为重叠基因
37、分段基因组：指病毒基因组由数条不同的核酸分子组成,多见于RNA病毒
38、乙肝病毒〔hepatitis B virus,HBV是目前已知感染人类的最小的双链DNA病毒
39、RNA病毒基因组为线状单链或双链,正链RNA病毒基因组均为线状RNA分子
仅HDV的负链RNA病毒基因组为环状,其余的负链RNA病毒均为线状
40、正链RNA病毒：基因组序列与mRNA相同,可直接作蛋白质合成的模板,此类RNA病毒具有侵染能力
41、负链RNA〔-RNA病毒：基因组序列与mRNA互补,基因组只有在其核衣壳蛋白转录酶存在下,才具有侵染能力
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42、蛋白质组是指特定细胞、组织乃至机体作为一个生命单元中所拥有蛋白质的集合,即生命体中携带的基因信息在某一时段所表达的全部蛋白质。
43、蛋白质组学是指对在特定的时间和环境下所表达的群体蛋白质研究的一门学问。主要在蛋白质水平上探索蛋白质的表达模式、作用模式、功能机制、调节控制以及蛋白质群体的相互作用。是在生物体或其细胞的整体蛋白质水平上进行的,并从一个机体或一个细胞的蛋白质整体活动来揭示生命的规律。
44、二维凝胶电泳是目前蛋白质组研究中最有效的分离技术。它由两向电泳组成,第一向以蛋白质电荷差异为基础进行分离的等电聚焦凝胶电泳,第二向是以蛋白质分子量差异为基础的SDS-聚丙烯酰***凝胶电泳。
45、质谱技术是样品分子离子化后,根据不同离子间的质量、电荷比值<质荷比,m/z>差异来确定分子量的技术。
46、凝胶滞后实验是近年来发展起来的用聚丙烯酰***凝胶电泳直接分析核酸与蛋白质结合的简单、快速、敏感方法。通过蛋白质与末端标记的核酸探针特异性结合,电泳时这种复合物较无蛋白结合的探针在凝胶中的泳动速度要慢,即表现为相对滞后。
47、细胞的破碎方法
机械法：液体剪切法与固体剪切法
本法不适合于染色体DNA的分离与纯化
非机械法：干燥法与溶胞法
溶胞法温和,能保证较高的得率与较好地保持核酸的完整性而得到广泛的应用
48、核酸的分离与纯化应去除的污染物主要包括
非核酸的大分子污染物
非需要的核酸分子
在核酸的分离纯化过程中加入的对后继实验与应用有影响的溶液与试剂
49、核酸浓缩最常用的方法---沉淀。其优点很容易地调整核酸溶液至所需浓度,能去除部分杂质与某些盐离子。
50、核酸沉淀的洗涤：用70%～75%的乙醇
51、核酸浓度测定 紫外分光光度法：适用于>µg/ml的核酸溶液
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52、荧光光度法: 用溴化乙锭〔EB。灵敏度可达1ng～5ng,适合低浓度核酸溶液的定量分析。SYBR Gold作为一种新的超灵敏荧光染料,可检出<20pg的双链DNA
53、核酸纯度鉴定
<1> 紫外分光光度法：A260/A280
,。比值升高与降低均表示不纯。

一般28S RNA的荧光强度约为18S RNA的2倍,否则提示有RNA的降解。
如果在加样槽附近有着色条带,则说明有DNA的污染。
54、核酸的保存
DNA的保存 DNA溶于TE缓冲液中在-70℃可以储存数年。
RNA的保存 NaAc溶液或双蒸水中,在-70℃至-80℃保存。以焦碳酸二乙酯<DEPC>水溶解RNA可延长保存时间。RNA沉淀溶于70%乙醇或去离子甲酰***液中,可在-20℃中长期保存