第四章抗体制药456节知识课件知识讲稿.ppt

第四节 基因工程抗体和抗体工程
抗体研究进展3个阶段：
　①1890年Behring发现白喉抗毒 素，特点：多克隆抗体；
　②1975年Kǒhler创建杂交瘤技术制备单克隆抗体；
　③1994年Winter基因工程方法制备抗体。
诊断血清的制备步骤
　①制备细菌抗原
　②免疫动物和制备抗体血清
⑶ 诊断血清诊断方法—直接凝集反应
⒉ 乙型肝炎病毒表面抗原的
反向被动血凝诊断试剂
⒊ 妊娠诊断试剂
⒋ 抗ABO血型系统血清
二、免疫标记技术用的抗体类试剂
能将抗原抗体反应放大，使常规方法不能观察的反应得以显现，因而大幅度提高抗原抗体反应的敏感性，用于对微量抗原物质进行定性或定量检测。
⒈ 荧光抗体诊断试剂
⑴荧光抗体的制备
⑵免疫荧光测定方法
⒉ 免疫酶抗体诊断试剂
⑴免疫酶染色法用抗体诊断试剂
⑵酶免疫测定用抗体诊断试剂
①HBsAg酶标诊断试剂
②HBeAg酶标诊断试剂
③HAVAg（甲型肝炎病毒抗原）
酶标诊断试剂
④测定HIV（人免疫缺陷病毒）抗
原的酶标抗体诊断试剂
⑤甲胎蛋白（AFP）酶标抗体诊
断试剂
⑥癌胚抗原（CEA）的酶标抗体
诊断试剂
⒊ 放射免疫用抗体诊断试剂
放射免疫技术是将放射性核素分析的高度灵敏性与抗原抗体反应的特异性结合起来建立的检测技术。
放射性核素标记抗体的方法：
①******-T法
②Iodogen氏法
抗原的测定有：
　①夹心法
　②间接法
　③竟争法
常用标记抗体试剂有
①HBsAg放射性核素标记抗体
诊断试剂
②HBeAg放射性核素标记抗体
诊断试剂
③HIV抗原放射性核素标记抗体
诊断试剂
④AFP放射性核素标记抗体
诊断试剂
⑤CEA放射性核素标记抗体
诊断试剂
三、导向诊断药物
放射性核素标记抗体
肿瘤放射免疫显像
放射免疫显像优点：
①在体内确切肿瘤定位作用，准确性达90%，灵敏度达100%。
②，并可检出肺、脑的转移灶。
③小分子抗体易到达肿瘤部位，
可显著提高T/NT值。
④抗体在肿瘤部位可保留6～9日
⑤能观擦抗体在血中的半衰期和
可能出现的不良反应。
放射免疫显像定位技术
将抗肿瘤单克隆抗体（McAb）与二乙基三***五乙酸（DTPA）在体外偶联成McAb-DTPA，再注入体内后，就能与体内组织相结合。3天后注入放射性核素In-113M（半衰期100m），因DTPA是重金属离子络合剂，所以In-113M可以结合到DTPA分子上，使肿瘤组织显像。这一过程在2小时内可完成。
建立预定位技术需解决3个问题：
　①抗体在肿瘤组织滞留要7天以上;在肿瘤组织内的量要满足显像要求。 　　　 ②Ab-DTPA偶联物比较稳定。
③内源性金属离子对DTPA的封闭
　作用要小。
第六节 抗体治疗药物
以抗体为载体的导向治疗药物，还不成熟。治疗用的制剂尚未达到商品化程度。障碍：分子量大，排斥反应
一、放射性核素标记的抗体治疗药物
抗体作为放射性核素的导向载体，标记操作简便、用量小。放射性核素标记的抗体对肿瘤细胞杀伤较大。
二、抗癌药物偶联的抗体药物
⒈ 常用的抗癌药物
氨甲喋呤（MTX）、阿霉素（ADM）、丝裂霉素（MMC）、环磷酰***（CTX）等。以人血清白蛋白作为中间载体，可明显提高每分子抗体所携带的MTX量，使体外细胞毒性提高2倍。
⒉ 抗体类药物逆转耐药性
肿瘤细胞对抗原药物可产生多药耐药性（MDR）。
MDR是由基因调控的，其编码蛋白称为P糖蛋白，其中P170是与肿瘤耐药相关的主要蛋白，由Mdr1基因编码，1280个氨基酸残基，相对分子质量170~180K的跨膜蛋白。
耐药性产生的机理
P蛋白是ATP酶依赖性药泵，药物进入细胞后与P蛋白结合，利用ATP水解释放的能量将药物泵出胞外，使胞内药物蓄积减少，因而产生耐药性。
三、***偶联的抗体药物
⒈ 免疫***及其换代制品
在导向药物中，***和抗体的交联物称为免疫***。
第一代免疫***是包含有A、B链完整***和抗体的交联物，其中B链的非特异性结合，使其仅能在体外应用。
第二代免疫***是利用抗体或抗体片段与***的A链或与A链作用相似的单链核糖体失活蛋白的结合物。因避免了第一代免疫***的非特异性，故能在体内有一定的抗肿瘤作用。
第三代免疫***是重组免疫***，用基因重组技术改造***基因，去除非特异性结合部位，明显降低了毒性反应。改造的***基因与小分子抗体基因重组后进行表达，所以