HMGB1与宫颈癌转移相关性的研究.pdf

天津医科大学硕+学位论文中文摘要目的高迁移率族蛋白1(1ligh mobility groupbox—l,HMGBI)在肝癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌等多种高转移性的恶性肿瘤中高表达,与肿瘤的发生、转移和血管生成密切相关。最近研究发现,HMGBl与原发肿瘤中的淋巴管密度有关, 并且血管内皮生长因子一C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF—C)的表达与HMGBl的表达呈正相关。宫颈癌是一种转移能力较强的肿瘤,早期即可出现淋巴道转移。我们前期研究发现,HMGBl在宫颈鳞癌组织高表达,并与临床分期和淋巴结转移密切相关;HMGBl在宫颈癌HeLa细胞内高表达,将siRNA 质粒瞬时转染HeLa细胞后,HMGBlmRNA和蛋白表达受到抑制、HeLa细胞生长变慢、细胞周期停滞在(32期。本研究继续探讨RNA干扰HMGBl基因表达后对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和迁移的影响;初步探讨外源性HMGBl对人淋巴管内皮细胞体外淋巴管生成的作用,为体内HMGBl在促进肿瘤淋巴管生成进而加速淋巴管转移上的可能作用提供理论依据。方法 -Neg转染宫颈癌HeLa细胞,采用G41 8筛选阳性单克隆细胞并扩大培养。 -PCR和Western blot检测转染前后的HeLa细胞中HMGBImRNA及蛋白表达水平的变化,分析RNA干扰效果。 。 。 、室模型实验检测siRNA干扰HMGBl表达后对HeLa细胞体外侵袭能力的影响。 ,不同浓度人重组HMGBl(human binant HMGBI,tlrHMGBl)处理人淋巴管内皮细胞,(human binant ,)作为阳性对照,采用MTT检测人淋巴管天津医科大学硕十学位论文内皮细胞的体外增殖能力。 —C处理人淋巴管内皮细胞前后的细胞体外迁移能力。 。结果 siRNA质粒成功转染HeLa细胞,于转染后48h达最高转染效率,通过G418稳定筛选单克隆细胞扩大培养,得到HMGBl稳定降表达的HeLa细胞株。 。 ,HeLa细胞体外生长减慢、迁移率降低、穿膜细胞数减少。 ,人淋巴管内皮细胞体外增殖能力、迁移能力和成管能力均增强,并呈现剂量和时间依赖性;、迁移和成管。结论 、侵袭和迁移能力,提示HMGBl可作为宫颈癌基因治疗的有效靶点并且RNAi可能为宫颈癌基因治疗开辟新思路。 ,可通过促进淋巴管生成而加速肿瘤细胞淋巴道转移,为宫颈癌的侵袭转移机制研究提供新的理论依据。关键词:高迁移率族蛋白l RNA干扰增殖侵袭迁移淋巴管细胞淋巴管生成 U 天津医科人学硕士学位论文 Abstract Objective Highmobility group box1(HMGB I)has beenconfirmed tobeclosely related with tumorigenesis,metastasis and angiogenesis in a variety ofmalignancies such as anC%colon cancer,breast cancer and prostate canc%etc. Recent findings have supported thehypothesis thatHMGB iscorrelated withlymph vessel density intheprimary tumorsand VEGF-C expression ispositivelycorrelated with HMGB cancer is akind oftumor withstrongmetastatic,and lymph node metastasis occurs inthee