技术二:MACS(磁珠分选)标记策略
应用MACS技术进行磁性细胞分选最重要的一点是高质量的标记。要尽可能地增强阳性细胞的标记,并减弱背景染色。有两种基本的磁性标记方式:直接标记和间接标记。
一、磁性细胞标记方式
1、直接技术二:MACS(磁珠分选)标记策略
应用MACS技术进行磁性细胞分选最重要的一点是高质量的标记。要尽可能地增强阳性细胞的标记,并减弱背景染色。有两种基本的磁性标记方式:直接标记和间接标记。
一、磁性细胞标记方式
1、直接磁性细胞标记(Direct magnetic cell labeling)
直接标记是最快速、最特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的MACS直标微珠可供选用。
2、间接磁性细胞标记(Indirect magnetic cell labeling)
间接磁性细胞标记需要联合使用单克隆或者多克隆抗体和MACS间标微珠。未结合抗体、生物素化抗体或者荧光素标记抗体均可作为一抗标记细胞,再使用抗免疫球蛋白微珠、抗生物素或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠作为二抗磁性标记细胞。几乎针对任何种系任何细胞的任何一种单抗或多抗,均可用于间接标记。间接标记主要在如下情况时选用:当没有直标磁珠时;需要用几种抗体的混合物同时分选或去除多种类型的细胞;间接标记有放大作用,因此可在磁性分选抗原表达弱的目的细胞时使用;使用自备抗体或者配体的磁珠分选中。
二、MACS分选策略
有两种基本的分选策略
阳性分选和去除分选。复合分选策略是将两种基本分选策略相结合或者联合使用多选微珠,从而实现细胞亚群的分选。
1、阳性分选策略(Positive selection strategy)
阳性分选中,目的细胞被磁性标记后,作为阳性标记组分直接分选出来。分选后的细胞不必去除MACS微珠,可立即用于培养或者后续操作。该方法可以将磁性标记的靶细胞富集10000倍。阳性分选策略优点:纯度高,回收率高,操作迅速、简便。
2 、去除分选策略( Depletion strategy )
去除分选是把非目的细胞磁性标记后从细胞混合物中去除的方法,即未磁性标记的细胞为目的细胞。MACS分选柱技术加上强磁性标记可以去除高达4个对数级的细胞。去除分选策略适用范围:去除不需要的细胞;缺乏针对目的细胞的特异性抗体(如肿瘤细胞);不需要抗体和目的细胞结合,即细胞不被激惹(如T细胞、B细胞、NK细胞功能分析);复合分选的一部分。
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