第2节基因工程的基本操作程序.doc

第2节 基因工程的根本操作程序
【本节重难点】
重点:基因工程根本操作程序的四个步骤
难点：（1）从基因文库中获取目的基因
（2）利用PCR技术扩增目的基因
【知识精讲】
教材梳理
基因工程的根本操作程序主要要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。
（2)载体DNA必需具备自我复制的才能，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。
（3)载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进展重组子的挑选。
(4）载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。
（5）载体DNA分子大小应适宜,以便提取和在体外进展操作，太大就不便操作。
实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进展人工改造后才能用于基因工程操作.
知识点三 将目的基因导入受体细胞
(1）转化-—目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程,称为转化。
说明：此处的“转化"和肺炎双球菌的转化实验中的“转化"的含义一样。
(2)基因工程中常用的受体细胞有：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤脓杆菌、酵母菌和动植物细胞
（3）将目的基因导入受体细胞的方法：根据受体和运载体的类型不同，：①将目的基因导入植物细胞—-脓杆菌转化法，还有基因枪法和花粉管通道法.②将目的基因导入动物细胞——显微注射技术③将目的基因导入微生物细胞
—-Ca＋处理细胞法
说明:将目的基因导入受体细胞的方法有很多种，同学们可以上网查询更多的方法和详细过程。
知识点四 目的基因的监测和鉴定
（1)检测对象：①检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因
②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质
（2）检测方法：分子检测法——①和②都是DNA分子杂交技术，③抗原－抗体杂交法
形态检测法——可根据目的性状的有无来判断目的基因是否表达
说明：基因操作过程中有多个步骤需要检测,此处只讲了目的基因的检测,还有目的基因是否被整合到了运载体上，运载体是否进入了受体细胞等都需要检测，详细过程见拓展点2.
知识点五 教材深化：人工合成目的基因的过程：
①目的基因转录成的mRNA 单链DNA双链DNA(目的基因）
②蛋白质中氨基酸的序列mRNA中的碱基序列DNA碱基序列目的基因目的基因
教材拓展
拓展点一 标记基因和标记基因的作用
课本上提到运载体要有标记基因，其作用是供重组DNA鉴定和挑选，那么怎样利用标记基因进展鉴定和挑选呢？请同学们阅读下面一段文字:运载体中所携带的一些抗性基因（如氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因）及发光基因等，能控制一些特殊物质的合成,利用这些特殊物质可以挑选运载体或重组运载体，这些基因就叫做标志基因。
在用限制酶切割目的基因和运载体、表达载体构建及将目的基因导入受体细胞,这一系列过程都是在人为控制条件下，在有关酶的作用下自行完成的，而不是人为条件下一个一个处理的，是很多对象同时进展的，这样，就会出现有的运载体被限制酶切割开，有的运载体没有被限制酶切割开，没有被限制酶切割开的运载体，就不可能连接上目的基因，只有被限制酶切开的运载体