补体溶血实验.pptx

补体溶血试验
补体溶血实验
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补体溶血试验
补体：一组存在于人和脊椎动物血清中及组织液中含有酶样活性，不耐热和功效上连续反应糖蛋白，是抗体发挥溶细胞作用必要补充条件，在正常情况下，血清中补体大多以无活性酶前体形式存在。
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补体溶血试验
补体：一组存在于人和脊椎动物血清中及组织液中含有酶样活性，不耐热和功效上连续反应糖蛋白，是抗体发挥溶细胞作用必要补充条件，在正常情况下，血清中补体大多以无活性酶前体形式存在。
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物理性质：不稳定，易受各种理化原因影响，加热，紫外线照射，机械震荡，酸碱和酒精等原因均可破坏补体。
灭活：56℃加热30min即可灭活
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补体系统生物学功效
（1）溶菌和溶细胞作用：补体系统激活后，在靶细胞表面形成MAC，从而造成靶细胞溶解。
（2）调理作用：补体激活过程中产生C3b、C4b、iC3b都是主要调理素，可结合中性粒细胞或巨噬细胞表面对应受体，所以，在微生物细胞表面发生补体激活，可促进微生物与吞噬细胞结合，并被吞噬及杀伤。
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（3）引发炎症反应：在补体活化过程中产生炎症介质C3a、C4a、C5a。它们又称为过敏***，与对应细胞表面受体结合，激发细胞脱颗粒，释放组***之类血管活性物质，从而增强血管通透性并刺激内脏平滑肌收缩。C5a还是一个有效中性粒细胞趋化因子。
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（4）去除免疫复合物：机制为：①补体与Ig结合在空间上干扰Fc段之间作用，抑制新IC形成或使已形成IC解离。②循环IC可激活补体，产生C3b与抗体共价结合。IC借助C3b与表示CR1和CR3细胞结合而被肝细胞去除。
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（5）免疫调整作用：①C3可参加捕捉固定抗原，使抗原易被APC处理与递呈。②补体可与免疫细胞相互作用，调整细胞增殖与分化。③参加调整各种免疫细胞功效。
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补体激活路径：
经典路径
旁路路径
MBL路径
相同点：三条路径有共同末端通路，即形成膜攻击复合物溶解细胞。
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1、补体经典路径(classical pathway)：是指以抗原抗体复合物为主要刺激物，使补体固有成份以C1、C4、C2、C3、C5～C9次序发生酶促连锁反应，产生一系列生物学效应和最终发生细胞溶解作用补体活化路径。
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2、替换路径（旁路路径）:是指不经C1、C4、C2活化，而是在B因子、D因子和P因子参加下，直接由C3b与激活物结合开启补体酶促连锁反应，产生一系列生物学效应和最终发生细胞溶解作用补体活化路径。在感染早期可为机体提供有效防御机制。其激活物是病原微生物等提供接触表面
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3、MBL路径：在感染早期，体内分泌甘露聚糖结合凝集素(MBL)和C反应蛋白。MBL与细菌表面甘露糖残基结合，然后与丝氨酸蛋白酶结合形成MASP（MBL相关丝氨酸蛋白酶），MASP继而水解C4和C2开启后序酶促连锁反应，产生一系列生物学效应和最终发生细胞溶解作用补体活化路径。激活物（或激活剂）是炎症期产生蛋白和病原体。
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三条路径区分见下表
区分点
经典路径
旁路路径
MBL路径
激活物
IgG1～3或IgM
与Ag复合物
脂多糖、酵母多糖、
凝聚IgA和IgG4
MBL
（甘露聚糖结合凝集素 ）
参加成份
C1～C9
C3，C5～C9， B、
P、D因子
同经典路径
C3转化酶
C4b2b
C3bBb
同经典路径
C3转化酶
C4b2b3b
C3bnBb
同经典路径
所需离子
Ca2＋ Mg2＋
Mg2＋
同经典路径
作用
参加特异性免疫在感染后期发作用
参加非特征免疫，在
感染后期发挥作用
同经典路径
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补体起源、采集
试验室惯用豚鼠、兔新鲜血清作为补体起源。
补体采集：普通选取3-5只健康未妊娠豚鼠或兔子，以无菌操作采集血液，采集好血液置4℃冰箱过夜，次日离心分离血清即可分离到补体。
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溶血素（抗绵羊红细胞抗体）：是以SRBC作为抗原免疫家兔所得到兔抗血清，无需深入提纯，但试验前应先56℃加热30min或者60 ℃3min灭活补体。
溶血反应：因为抗原（红血球）和抗体（溶血素）进行特异性结合，在电解质存在时能发生凝集，若再有补体参加，红血球则被溶解。
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试验目标
掌握补体测定方法
加深了解补体作用和激活条件
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材料与试剂
试剂
：2%绵羊红细胞
：