西南民族大学兽医微生物学(实验课件）.ppt

注意自身防护
严防病原微生物的散布
作好标记，记录
防火 节约 清洁 秩序
实验须知
实验一
显微镜的使用及细菌形态结构观察
实验二
细菌的革兰氏染色
实验三
培养基的制备
实验四
细菌分离及纯培养
支持物
无机盐
能源
培养基中各成分的主要作用
常用培养基种类
厌氧培养基
基础培养基
增菌培养基
选择培养基
鉴别培养基
以牛肉膏蛋白胨培养基（基础培养基）为例：
1．准确称量：按下面配方准确称量各组分：
牛肉膏 ；蛋白胨 ； NaCl ；水
1000ml。
将各组份置于一适当的三角瓶中。
2．溶化：将上述烧杯在石棉网或磁力搅拌器
上加热，使各成分溶解，如果有水分损失，
应补充至所需水量。
3．调pH：酸度计的使用方法。
实验步骤
若配制固体培养基，%-2%（W/V）加
入琼脂。
4．加塞：在三角瓶的瓶口上塞上棉塞。
5．包扎：加塞后，在棉塞外包一层牛皮纸，用
麻绳扎好。
6．灭菌：，121℃，
20min高压蒸气灭菌。
7．无菌检查：将灭菌培养基放入37℃的室温中
培养24-48h，做无菌检验。
培 养 基 制 备 流 程
实验四 细菌的分离与纯培养
目的意义：
掌握平板划线法分离培养及纯化的基本操作技术
基本原理：
从混杂的细菌群体中获得只含有一种或某一株细菌的过程称为细菌的分离与纯培养。平板划线法是最常用的方法之一，通过沾有样本的接种环在平板上划线，将样本“稀释”，培养后使之形成单个菌落，从而达到分离的目的。
器材及试剂:
样品：土壤悬液
培养基：牛肉膏蛋白胨平板及斜面革兰氏
染色液、接种环、酒精灯、恒温培养箱、
显微镜等。
实验步骤:
1、划线：在酒精灯火焰旁无菌挑取一环土壤悬液，在平板上划线，划线完毕后，将培养皿倒置于37℃培养箱中培养24-48h。
1
2
3
4
2、细菌培养性状的观察
支原体“煎蛋”样菌落
炭疽杆菌的“卷发”样菌落
细菌在液体培养基中的生长表现表现
沉淀生长
混浊生长
表面生长
细菌在半固体体培养基中的表现
混浊生长
沿穿刺线生长生长
无菌毛
细菌
无菌毛
细菌
3、纯培养：长出单个菌落后，结合形态学检查，从中挑取可疑菌落接种至斜面，待菌苔长出后，染色观察是否为单一微生物。若不纯，
需重复上述纯
化过程，直到得
到纯培养物。
细菌分离培养流程图
实验五 细菌的生化反应试验
目的意义：
了解糖发酵试验、IMViC试验及硫化氢试验的原理、方法及在细菌鉴定中的作用。
基本原理：
不同的细菌具有不同的酶系统，对糖类和蛋白质的分解能力不同，最终形成的分解代谢产物不同。通过对代谢产物的检测，可鉴定细菌。
器材及试剂:
菌种：大肠杆菌、沙门氏菌及产气肠杆菌斜面
培养基：葡萄糖发酵培养基试管、乳糖发酵培养基
试管、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水
培养基、柠檬酸盐斜面培养基、醋酸铅培养
基等。
***红指示剂、40%KOH、5% α-萘酚、***、吲
哚试剂等
试管架、酒精灯、接种环等
实验步骤:
（一）糖发酵试验：
1、用记号笔在各试管中表明发酵培养基名称和所接
种的细菌。
2、取葡萄糖发酵培养基管3支，分别接种大肠杆菌、
沙门氏菌，第三支不接种，作为对照。另取3支
乳糖发酵培养基，作同样的操作。
3、37℃ ，24-48h。
4、观察颜色变化及有无气体产生。
5、结果：将结果填入下表，“ ”表示产酸或产气；“+”表示产酸不产气,“-”表示不产酸不产气。
糖类发酵
大肠杆菌
沙门氏菌
对 照
葡萄糖发酵
乳糖发酵
（二）IMViC试验:(吲哚、***红、伏-普、柠檬酸盐）
1、接种和培养：
用接种针将大肠杆菌与产气肠杆菌分别接种于2支蛋白胨水培养基（吲哚试验），2支葡萄糖蛋白胨水培养基（***红试验和伏-普试验），2支柠檬酸盐斜面培养基，置37℃ 培养2d。
2、结果观察：
（1）吲哚试验：于培养2d后的蛋白胨水培养其内加3-4滴***，摇动数次，静置1-3分，待***上升后沿试管壁徐徐加入2滴吲哚试剂，在***和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。
（2）***红试验：于培养2d后，将1支葡萄糖蛋白胨水培养物内加***红试剂