抑制小胶质细胞MT1MMP表达对胶质瘤侵袭与迁移的影响.pdf

摘要受体(TLR),且TLR及其配体的相互作用仍存在,但是不能引起GIMs激活而增强细胞身吞噬功能;另外,由于缺少必要的刺激分子CD80()、CD86(B7—2)和CD40的表达,GIMs不能提供充足的刺激以激活T淋巴细胞。在对从老鼠分离培养的小胶质细胞的研究中发现,胶质瘤相关小胶质细胞在受到刺激信号后并不上调第二型主要组织相容性复合体(MHC—II)的表达,以至于小胶质细胞所表达的主要组织相容性复合体(MHC)不足以进行抗原呈递激活T淋巴细胞,。胶质瘤细胞能够下调脂多糖(LPS)。另外,(),后者抑制小胶质细胞由IFN—Y诱导的MHC分子表达引起抗原呈递功能下降,直接导致小胶质细胞难以激活T淋巴细胞。以上资料表明,由于受到胶质瘤细胞对小胶质细胞的吞噬、抗原呈递及分泌释放促炎症因子等功能的抑制,小胶质细胞在胶质瘤组织中不能启动针对癌细胞的、有效的固有性及适应性免疫反应。近期研究表明,小胶质细胞与胶质瘤微环境免疫抑制及促胶质瘤增殖、浸润有密切关系。金属蛋白酶(MMPs)所诱导的基质降解机制在胶质瘤侵袭和迁移过程中具有关键性的作用。,而小胶质细胞和胶质瘤细胞本身均是MMPs的重要细胞来源。这些MMPs被分泌释放入肿瘤微环境,参与降解胶质瘤细胞外基质,并最终为胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移过程“铺路”。研究发现,胶质瘤能够引起小胶质细胞膜上MTl一MMP表达升高,而小胶质细胞MTl一MMP高表达又反过来促进胶质瘤所分泌释放的pro—MMP一2激活,,最终促进胶质瘤侵袭和迁移。因此,如果能够抑Nd,胶质细胞中促胶质瘤相关MMPs的表达,则有望降低胶质瘤侵袭和迁移的能力。阿托伐他汀是3一羟一3一***戊二酰辅酶A()还原酶抑制剂,一直以来作为治疗心血管疾病药物被广泛应用于降低血液中胆固醇含量,但最近硕士学位论文发现阿托伐他汀具有抗肿瘤作用。、。因此,我们选择阿托伐他汀作为干预因素探讨其是否能够影响胶质瘤细胞和小胶质细胞之间MMPs表达及其对胶质瘤侵袭和迁移影响。K~8法定量检测梯度浓度阿托伐他汀对原代人小胶质细胞和U87胶质瘤细胞活性影响。2、细胞迁移实验和肿瘤侵袭实验:通过胶质瘤条件培养基(GCM)孵化小胶质细胞,制备小胶质细胞条件培养基(MCM)。应用Transwell细胞迁移实验和肿瘤侵袭实验,检测MCM干预下U87侵袭和迁移能力,同时使用阿托伐他汀干预GCM孵化小胶质细胞制备MCM过程,检测U87侵袭和迁移能力改变。3、明胶酶谱法检测阿托伐他汀干预下U87胶质瘤细胞MMP-2和MMP-9表达,及阿托伐他汀与GCM联合干预下小胶质细胞MMP一2和MMP-9表达。4、WesternBlotting检Ng.-I托伐他汀干预下U87胶质瘤细胞MTl一MMP、P-p38MAPK、P-ERK和P—JNK表达,及阿托伐他汀与GCM联合干预下小胶质细胞MTl一MMP、P—p38MAPK、P—ERK和P—JNK表达。5、、—MMP相关基因表达,、。结果l、10。4mol/L阿托伐他汀作用于细胞24h,U87胶质瘤细胞与和小胶质细胞细胞活力均明显降低,与对照组相比,差异有统计学意义(尸<)。10‘10mol/L阿托伐他汀显著增强小胶质细胞活力,与对照组相比,差异有统计学意义(尸<)。10一~1旷mol/L各组U87胶质瘤细胞与小胶质细胞活力与对照组相比无明显变化,差异无统计学意义(P>)。根据结果,我们选择药物安拿浓度内最大药物浓度10巧mol/L作为后续实验药物浓度。摘要2、细胞迁移实验:105mol/L阿托伐他汀干预24h,,+,差异有统计学意义(P<)。MCM干预24h,,与对照组相比显著增加,差异有统计学意义(尸<)。阿托伐他汀MCM干预24h,+,与MCM干预组比较显著减少,差异有统计学意义(P<)。肿瘤侵袭实验:MCM干预24h,每400倍镜下U87细胞