大鼠丙氨酸转氨酶谷丙转氨酶(ALTGPT).pdf

大鼠丙氨酸转氨酶 /谷丙转氨酶（ ALT/GPT）
酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断 !
预期应用
ELISA 样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进
行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1、 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100 ，余孔分别加
标准品或待测样品 100 ，注意不要有气泡，加样 时将样品加于酶标板底部，尽量不触及 孔
壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜， 37 温育 2 小时。为保证实验结果有效
性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2、 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液 A 工作液 100 （临用前配制），酶标 板
加上覆膜，37 温育 1 小时。
3、 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 400 /每孔，甩干（也可轻
拍将孔内液体拍干）。
4、 每孔加检测溶液 B 工作液（临用前配制） 100 ，加上覆膜， 37 温育 1 小时。
5、 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。
6、 每孔加底物溶液 90 ，酶标板加上覆膜 37 避光显色（反应时间控制在 15-30 分钟，当
标准孔的前 3-4 孔有明显的梯度蓝色，后 3-4 孔梯度不明显时，即可终止）。
7、 每孔加终止溶液 50 ，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底 物
液的加入顺序相同。
8、 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（ OD 值）。
注：
1、 试剂准备：所有试剂在使用前应平衡至室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。
实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2、 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导
致不同的 “预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间（包括标准品及所有样品）最好控制在 10 分钟内。推荐设置复孔进行实验。
3、 温育：为防止样品蒸发，实验时将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内，以避免液体蒸发 ；
洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态；同时应严格遵守给定
的温育时间和温度。
4、 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中
吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响最后的酶标仪读数。
5、 试剂配制：Detection A 及