六个ministr基因座群体遗传学研究.pdf

河北医科大学硕士学位论文六个miniSTR基因座群体遗传学研究姓名:李霞申请学位级别:硕士专业:法医学指导教师:丛斌20090301中文摘要六个miniSTR基因座群体遗传学研究摘要目的:短串联重复序ylj(shorttandemrepeats,STR)遗传标记系统,由于在人类基因组中分布广泛,具有高度的遗传多态性以及简单快捷的检测方法,已成为法医物证鉴定的主流技术。然而,在法医学实践中经常会面临高度降解的检材,如使用商品化STR试剂盒进行扩增,片段较大的STR基因座往往无法得到正确的分型或是分型失败。miniSTR基因座分析技术即是在设计引物时,使其尽可能靠近核心重复序列从而缩短扩增片段长度,以提高检测的灵敏度及降解片段的检出率。miniSTR基因座已被欧洲DNA分型工作组(theeuropeanDNAprofilinggroup,EDNAP)定义为继STR之后的新一代遗传标记,2006年美国AB公司已经研制开发了MiniFiler试剂盒。miniSTR,,miniVSTR的研究己显示了其在法医学领域的重要价值。miniSTR应用于法医学时,进行准确、快速、方便的分型检测显得至关重要,因此对其分型结果的准确性、公正性和可靠性提出了更高的要求。而等位基因分型标准物(allelicladder,简称AL)的制备又是实现基因座准确分型命名的关键。只有具备了一套精确的、国际标准化命名的分型标准物,才有可能对miniSTR分型结果做出正确判型和命名,才有可能在各国、各实验室之间实现miniSTR分型的可比性。为研究更多的miniSTR基因座用于法医学鉴定,解决一些疑难检材的DNA分型,本课题拟采用分子克隆技术制备六个miniSTR基因座D10S1248、D2S441、D1S1677、中文摘要D9S1122、D10S1435矛IDl7S1301等位基因分型标准物,解决miniSTR分型的准确性和标准化问题,并应用于湖南汉族群体遗传学研究中,探讨该方法制备的等位基因分型标准物在法庭科学实践中的应用价值。方法:。采用PCR扩增,10%变性聚丙烯酰***凝胶垂直电泳,银染显色,在所选样本中筛选、分离六个miniSTR基因座所有目的等位基因,用Promega公司凝胶回收试剂盒纯化后,,转染DH5a1M感受态大肠杆菌,扩大培养,4%琼脂糖凝胶电泳初步筛选阳性克隆,测序证实连接正确目的等位基因的核心序列结构和重复次数,并按照国际法庭血液遗传学学会(ics,ISFH)推荐的命名原则对各等位基因命名;提取重组质粒,以其为模板进行PCR扩增,根据琼脂糖检测的显色强度或GeneQuant微量蛋白核酸检测仪对扩增产物的定量结果,调整各成分的比例,使峰高尽可能达到平衡,混合各等位基因PCR扩增产物,即获得各miniSTR基因座的等位基因分型标准物。应用自制miniSTR基因座等位基因分型标准物进行所选样本的群体遗传学研究:将基因座D10S1248和D17S1301上游引物5’端用6-FAM荧光标记,基因座D2S441和D9S1122上游引物5’端用HEX荧光标记,基因座D1S1677和D10S1435上游引物5’端用TAMRA荧光标记,进行PCR扩增,扩增产物与自制等位基因标准分型标准物在ABIPRISM310基因分析仪上同步电泳,。利用统计中文摘要遗传学研究,发现该六个miniSTR基因座具有中高度遗传多态性,可用于法医学个人识别和亲权鉴定,并在高度降解检材的检测中具有较高的应用价值。关键词:分子克隆技术;等位基因分型标准物;miniSTR;icPolymorphismoftheSixMiniSTRLociinHunanHanPopulationsABSTRACTobjective:Shorttandemrepeat(STR)icmarkersystem,,ases,DNAsamplesarehighlydegradedformanyreasons,alossofsignalistypicallyobservedwithlarger-