浙大生化实验报告氨基转换反应.doc

实验报告课程名称: 生化实验甲指导老师: 成绩: __________________ 实验名称: 氨基移换反应及其产物的鉴定实验类型: 同组学生姓名: 一、实验目的和要求(必填) 二、实验内容和原理(必填) 三、实验材料与试剂(必填) 四、实验器材与仪器(必填) 五、操作方法和实验步骤(必填) 六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析(必填) 八、讨论、心得一、实验目的和要求 1 、学****鉴定氨基移换反应的简便方法及其原理; 2 、学****纸层析的原理和操作技术。二、实验基本原理 1. 氨基移换反应: 在氨基移换酶(转氨酶) 的催化下,氨基酸的α- 氨基和α- ***酸的α- ***基之间发生的互换反应。转氨酶的种类很多,任何一种氨基酸进行转氨作用时都由其专一的转氨酶催化。转氨酶的最适 pH 接近 ,在各种转氨酶中,谷丙转氨酶( GPT )和谷草转氨酶( GOT )的活性最强。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中谷丙转氨酶( glutamic pyruvic transaminase, GPT ) 、谷草转氨酶( glutamic oxalacetic transaminase,GOT )活性较高。 GPT 催化下的转氨基反应为: L -谷氨酸脱氢酶在体内特别是在肝细胞内含量丰富,活性高,催化 L -谷氨酸氧化脱- NH2 ,加碘乙酸能抑制其活性,从而可以保护氨基移换反应的产物 L -谷氨酸。本实验用纸层析法, 检查由丙氨酸和α—***戊二酸在肝细胞谷丙转氨酶( GPT) 的作用下所生成的谷氨酸,证明组织内的氨基移换作用。 2. 纸层析原理: 滤纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析。利用不同物质在两个互不相溶的溶剂中分配情况(溶解度)的不同来分离混合物的一种技术。层析溶剂是由有机溶剂和水组成。滤纸纤维上羟基具有亲水性, 因此吸附一层水作为固定相, 而通常把有机溶剂作为流动相。进行分离时, 由于被分离物质的组分在两相中的分布不同, 随着流动相的移动, 物质将在两相间进行连续的、动态的不断分配, 从而造成不同组分移动的速度也不相同。易溶于流动相中的组分移动快,在固定相中溶解度大的组分移动慢,于是得到分离。专业: 生环姓名: 学号: 日期: 地点: 装订线用滤纸层析法分离氨基酸,是根据氨基酸样品的 R 基团的化学结构或极性大小的不同,将样品氨基酸溶解在适当的溶剂( 磷酸缓冲液)中, 点样在滤纸的一端, 再选用适当的溶剂系统(酚溶液) ,通过毛细现象向另一端展层,展层完毕后,用茚三***作为显色剂,即可得到氨基酸样品的分离图谱。 3. 茚三***的显色原理: 氨基酸+ 茚三***类紫红色复合物三、实验材料与试剂 1 、实验材料动物肝脏( 牛蛙肝或猪肝) 2 、实验试剂⑴ 磷酸缓冲液( ) (转氨基反应所需缓冲溶液); ⑵ α-丙氨酸( ) (转氨基反应的底物,纸层析的标准样品); ⑶ α-***戊二酸( ) (转氨基反应的底物); ⑷ 谷氨酸( ) (纸层析的标准样品); ⑸展层溶剂-酚溶液:水饱和酚:冰乙酸( 300 :1) (纸层析用); ⑹ 10 %三***乙酸(终止酶促反应,使转氨酶及