肠道杆菌.doc

课程名称医学微生物学实验授课题目实验 6肠道杆菌授课日期年月日授课班级授课时数 2授课方式实验授课重点难点 1 .主要肠道杆菌的形态、染*** 2 .主要肠道杆菌的培养特性 3 .主要肠道杆菌的生化反应 4 .肥达反应 5 .粪便肠道致病菌的分离和鉴定授课内容教具与时间分配一、肥达反应讲解操作( 50min ) 1 .肥达反应:用已知的伤寒沙门菌 O、H 抗原和副伤寒甲、乙杆菌 H 抗原与不同稀释度的待检血清作定量凝集试验,根据抗体的含量及增长情况,供诊断肠热诊时参考。微量板 12345678 伤寒 O 伤寒 H 副甲 H 副乙 H 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1: 1280 生理盐水血清稀释加入菌液 a. 病人血清的稀释(管外稀释): b. 如表加 Ag ,从后往前加,每孔 。加样完毕后,将加样板放在实验台上顺时针方向磨动几下,使 Ag 和 Ab 混匀。 c. 微量板放入 45℃孵箱,半小时(该部分讲解完后,即叫同学开始先做,在孵育的过程中讲解肠道病原菌鉴定的内容) d. 观察结果 e. 如何书写报告如果仅有伤寒杆菌“O”、“H”抗原凝集,且都凝集至第 5 孔,即 1: 320 稀释血清(最终稀释度也就是加菌液以后,为 1: 640 ), 则报告: 伤寒 O1: 640 ,伤寒 H1: 640 二、肠道杆菌的特性及鉴定( 30min ) 肠道杆菌一般都是 G - ,中等大小的杆菌,在形态学上很难区分,可观察示教片。一般不从形态学上进行鉴定,粪便肠道病原菌的分离与鉴定过程如下: 37℃粪便标本选择鉴别培养基初步生化血清学鉴定( SS 平板) 24hr (双糖管) 已知 Ag 检测未知 Ab 1. SS 平板:分离肠道病原菌的强选择培养基成分:基础培养基、乳糖、枸橼酸钠、硫代硫酸钠、枸橼酸铁、胆盐、煌绿、中性红( pH - ,红→橙黄) Ag Ab 已知未知滴度测授课内容教具与时间分配作用: a 乳糖,中性红:致病菌不分解乳糖,但分解蛋白胨产生碱性物质→菌落淡黄色;大肠杆菌分解乳糖产酸,菌落呈红色 b 胆盐、枸橼酸钠、煌绿:可抑制肠道非致病菌如 的生长,而对肠道致病菌抑制作用弱,可以增